骨桥蛋白（OPN）在TLR2信号通路介导的肿瘤细胞浸润与转移中作用机制的研究

发布时间：2017-10-11 00:21

  本文关键词：骨桥蛋白（OPN）在TLR2信号通路介导的肿瘤细胞浸润与转移中作用机制的研究

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【摘要】：乳腺癌是女性中发病率高，危害大的癌症之一，严重影响女性的身心健康。治疗乳腺癌的难点在于乳腺癌细胞具有很强的浸润与转移能力，这也是造成乳腺癌患者死亡率高的主要原因。因此对乳腺癌细胞浸润与转移机制的深入研究，对乳腺癌的预防以及临床治疗具有重要意义。 骨桥蛋白（Osteopontin，OPN）是一种磷酸化糖蛋白，它可以在胞内发挥作用，也可以分泌到细胞外发挥其生理功能。OPN可以参与到许多生理病理过程中，如炎症反应，免疫反应，细胞凋亡等。也可通过与细胞表面的特异性受体结合，介导肿瘤细胞的粘附、浸润与转移。但是，目前对OPN在肿瘤细胞中的作用机制还不清楚，需要更深入的研究。 TLR（Toll-like receptors，Toll样受体）是一类在人体内广泛存在的并且高度保守的重要的模式识别受体，能够识别并结合病原相关分子模式（PAMP），在天然免疫反应中发挥重要的作用。近来研究表明，多种肿瘤细胞中也有TLR表达，，并与肿瘤的发生、发展以及浸润与转移具有一定相关性，但目前对其作用机制尚不清楚。 实验室前期研究发现，TLR2和OPN在两种乳腺癌细胞MCF-7（低转移乳腺癌细胞）和MDA-MB-231（高转移乳腺癌细胞）中存在差异性表达， MCF-7细胞中OPN和TLR2的表达均低于MDA-MB-231。还有研究表明TLR2和OPN分别在乳腺癌细胞的浸润转移中起促进作用，那么TLR2对乳腺癌细胞的浸润与转移作用是否与OPN有关系呢？二者又是通过什么机制相互作用的呢？为了解决以上疑问，本实验选取MDA-MB-231细胞（高转移的乳腺癌细胞）为研究对象，通过Pam3CSK4（TLR1-TLR2二聚体的激活剂）和LTA（TLR2的激活剂）激活TLR2信号通路，研究OPN的表达变化情况，进而研究TLR2与OPN在肿瘤浸润与转移中的作用机制，为乳腺癌的临床治疗提供理论依据。 本论文利用MTT法、细胞创口愈合实验、Transwell基质胶细胞侵袭实验以及软琼脂克隆形成实验等技术手段，检测了Pam3CSK4和LTA对乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖、迁移、侵袭及非锚定生长能力的影响。结果表明，Pam3CSK4和LTA的刺激能够促进MDA-MB-231细胞的增殖、浸润与迁移能力。 利用实时定量PCR技术检测了乳腺癌细胞MDA-MB-231在Pam3CSK4和LTA刺激后TLR2和OPN各亚型的基因表达变化。结果显示，Pam3CSK4和LTA的刺激均能显著提高TLR2基因的表达，且二者的刺激能够显著上调OPN各亚型基因的表达。ELISA检测表明，Pam3CSK4和LTA刺激对iOPN和sOPN蛋白的表达具有明显上调作用。 利用肿瘤转移PCR芯片技术对肿瘤转移相关的84个基因的表达情况进行分析。结果表明Pam3CSK4和LTA刺激乳腺癌细胞MDA-MB-231后，影响肿瘤转移相关基因的表达。 综上所述，本实验对OPN介导的TLR2信号通路对乳腺癌细胞MDA-MB-231浸润与转移影响的作用机制进行了初步研究，并通过肿瘤转移PCR芯片检测了刺激后肿瘤转移相关基因的差异表达，为癌细胞浸润与转移机制的研究提供了新思路，为乳腺癌的临床检测和治疗提供了基础资料。
【关键词】：骨桥蛋白（OPN） Toll样受体2 乳腺癌细胞 Pam3CSK4 LTA
【学位授予单位】：山东师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R730.2
【目录】：

• 目录4-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 综述10-20
• 1. 骨桥蛋白（OPN）的结构特征10-13
• 2. 骨桥蛋白（OPN）与天然免疫13-15
• 3. 骨桥蛋白（OPN）与细胞介导的免疫反应15-18
• 4. 骨桥蛋白（OPN）与肿瘤的发展和转移18
• 5. 总结与展望18-20
• 前言20-24
• 第一章 PAM3CSK4 和 LTA 刺激对人乳腺癌细胞转移侵袭能力的影响24-35
• 1．实验材料与试剂24-25
• 2．实验方法25-29
• 2.1 人乳腺癌细胞株培养25
• 2.2 细胞增殖活力检测25-26
• 2.3 细胞创口愈合实验26-27
• 2.4 Transwell 基质胶细胞侵袭实验27-28
• 2.5 软琼脂克隆形成实验28-29
• 3．实验结果29-34
• 3.1 Pam3CSK4 和 LTA 刺激对人乳腺癌细胞增殖活力的影响29-31
• 3.2 Pam3CSK4 和 LTA 刺激对 MDA-MB-231 细胞迁移能力的影响31-32
• 3.3 Pam3CSK4 和 LTA 刺激对 MDA-MB-231 细胞侵袭能力的影响32-33
• 3.4 Pam3CSK4 和 LTA 刺激对 MDA-MB-231 细胞非锚定生长能力的影响33-34
• 4. 本章小结34-35
• 第二章 PAM3CSK4 和 LTA 刺激对 OPN、TLR2 表达的影响35-43
• 1. 实验材料与试剂35-36
• 2. 实验方法36-40
• 2.1 利用 Trizol 法提取 MDA-MB-231 细胞的总 RNA36-37
• 2.2 反转录37-38
• 2.3 实时定量 PCR（Real-time PCR）38-39
• 2.4 酶联免疫吸附实验（ELISA）39-40
• 3．实验结果40-42
• 3.1 Pam3CSK4 和 LTA 刺激对 OPN 各亚型以及 TLR2 基因表达的影响40-41
• 3.2 Pam3CSK4 和 LTA 刺激对 MDA-MB-231 细胞中 OPN 蛋白表达的影响41-42
• 4. 本章小结42-43
• 第三章 利用肿瘤转移 PCR 芯片检测 PAM3CSK4 和 LTA 刺激后乳腺癌细胞中肿瘤转移相关基因的表达变化43-61
• 1．实验材料与试剂43-44
• 2．实验方法44-49
• 2.1 Pam3CSK4 和 LTA 刺激乳腺癌细胞 MDA-MB-23144
• 2.2 总 RNA 提取44-45
• 2.3 RNA 质量检测45-46
• 2.4 cDNA 合成46-48
• 2.5 实时定量 PCR（Real-Time PCR）48-49
• 2.6 结果数据分析49
• 3．实验结果49-60
• 3.1 RNA 完整性程度的检测49-51
• 3.2 对 PCR 产物的特异性分析51-52
• 3.3 肿瘤转移 PCR 芯片分析52-60
• 4. 本章小结60-61
• 讨论61-64
• 结论64-65
• 参考文献65-73
• 附录 1 主要仪器设备73-74
• 附录 2 英文缩写词74-75
• 致谢75

【共引文献】

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本文编号：1009452