靶向沉默甲胎蛋白表达对人肝癌细胞HepG2细胞功能学的研究

发布时间：2017-10-11 16:23

  本文关键词：靶向沉默甲胎蛋白表达对人肝癌细胞HepG2细胞功能学的研究

  更多相关文章： AFP RNA干扰 HepG2细胞 慢病毒 侵袭 迁移

【摘要】：目的:构建靶向沉默甲胎蛋白的慢病毒载体并评价沉默效果。探讨沉默甲胎蛋白表达对人肝癌细胞系Hep G2细胞功能学方面的影响,为后续对肝癌侵袭及转移方面实验研究建立细胞模型。方法:采用RNA干扰技术构建靶向沉默AFP基因的慢病毒载体,转染HepG2细胞,在荧光倒置显微镜下观察转染后绿色荧光细胞的数量,再用嘌呤霉素筛选纯化以获得稳定沉默甲胎蛋白的细胞系。采用实时荧光定量PCR技术检测转染组及对照组肝癌细胞中AFP的mRNA表达水平;Western blotting检测沉默后AFP的蛋白表达水平变化;MTT法检测转染组及对照组肝癌细胞的增殖情况;运用Tranwell实验检测细胞的侵袭能力;Wound Healing实验检测细胞的迁移能力。结果:沉默组AFP在mRNA水平较空白组下降约90%(P0.05),在蛋白表达水平下降(62.53±6.17)%(P0.05);MTT法结果显示沉默组细胞培养6天后,细胞增值率下降(31.17±1.16)%(P0.05);Transwell实验沉默组细胞侵袭个数较空白组和阴性组降低明显,依次为(174.80±16.20)个、(315.25±19.70)个、(304.60±20.30)个,(P0.05);Wound Healing实验48h后,沉默组迁移率较空白组和阴性组明显下降,分别为(29.96±6.79)%、(54.77±9.24)%、(49.04±8.31)%,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:靶向沉默AFP的慢病毒载体感染HepG2细胞能够有效抑制AFP基因的表达;AFP表达水平下降使Hep G2细胞增殖,侵袭转移能力明显受到抑制。
【关键词】：AFP RNA干扰 HepG2细胞 慢病毒 侵袭 迁移
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-8
• 第一章 研究背景8-18
• 一、肝癌的概述8-14
• 1.1 肝癌的流行病学概况8-9
• 1.2 肝癌的发生发展9-11
• 1.3 肝癌的早期诊断11-12
• 1.4 肝癌的治疗12-14
• 二、甲胎蛋白与肝癌的关系14-17
• 2.1 AFP概述14
• 2.2 AFP与HCC增殖的关系14-15
• 2.3 AFP与HCC侵袭与转移的关系15-17
• 三、实验研究目的及意义17-18
• 第二章 材料方法18-32
• 1、实验材料18-21
• 1.1 肝癌细胞株18
• 1.2 试剂18-19
• 1.3 仪器19-20
• 1.4 耗材20
• 1.5 溶液配制20-21
• 2、实验方法21-31
• 2.1 细胞培养21-22
• 2.2 慢病毒转染22-24
• 2.3 qRT-PCR检测24-26
• 2.4 Western Blot检测26-29
• 2.5 MTT检测细胞增殖能力29-30
• 2.6 Transwell检测细胞侵袭能力30
• 2.7 Wound Healing检测细胞迁移能力30-31
• 3、统计学处理31-32
• 第三章 结果32-35
• 第四章 讨论35-37
• 第五章 结论37-38
• 参考文献38-45
• 附录1 英文缩略词表45-46
• 在学期间的研究成果46-47
• 致谢47

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