肿瘤相关纤维母细胞对MNK45，SGC7901细胞PD-L1表达的影响

发布时间：2017-10-11 17:22

  本文关键词：肿瘤相关纤维母细胞对MNK45，，SGC7901细胞PD-L1表达的影响

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【摘要】：研究背景胃癌是全球最常见的消化道恶性肿瘤之一,东亚国家如韩国、日本及中国多发,我国西北地区胃癌的发病率及死亡率都高居榜首。肿瘤细胞可以逃避免疫系统的监视即免疫逃逸,以往的研究主要集中在肿瘤细胞在免疫逃逸中自身的改变,关于肿瘤微环境对免疫的影响知之甚少。肿瘤相关纤维母细胞(T umor-associated fibroblasts,TAF)是肿瘤微环境的重要组成部分,它不同于正常的纤维细胞,具有特殊的生理、生化特点,TAF可抑制免疫细胞的功能,但具体机制尚未阐明。在肿瘤免疫中CD8+T细胞发挥重要的作用,T细胞的细胞膜上有一类分子对T细胞的激活起负调节作用,这类分子被称为共抑制分子。主要的共抑制分子包括细胞毒T淋巴细胞相关抗原4(Cytotoxic T-lymphocyte associ ated antigen 4,CTLA-4)和程序性死亡因子1(Programmed death factor 1,PD-1)。PD-1表达于多种细胞表面,PD-1在外周遇到相应的配体PD-L1(Programm ed death factor ligand 1,PD-L1)时被激活,PD-1与相应的配体结合即抑制T细胞激酶活性。本研究旨在探讨TAF对胃癌细胞PD-L1表达的影响。方法以胃癌细胞株MNK45,SGC7901和TAF细胞进行Trans well非接触式共培养48小时的MNK45,SGC7901细胞为实验组,单独培养的MNK45,SGC7901细胞为对照组,两组培养条件一致。倒置显微镜计数实验组和对照组MNK45,SGC7901细胞数、流式细胞仪分别检测实验组和对照组MNK45,SGC7901细胞PD-L1的蛋白表达率、PCR分别检测实验组和对照组SGC7901,MNK45细胞PD-L1 mRNA的表达。T检验两组间的差异。结果实验组胃癌细胞数多于对照组,实验组PD-L1蛋白表达率和mRNA水平都高于对照组,两组间有统计学差异。结论TAF促进胃癌细胞株MNK45,SGC7901的生长,增加MNK45,SGC7901细胞PD-L1表达。
【关键词】：胃癌 肿瘤相关纤维母细胞 PD-1/PD-L1 免疫逃逸
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.2
【目录】：

• 中文摘要3-4
• 英文摘要4-5
• 英文缩略词对照表(ABBREVUATIONS)5-8
• 第一章 前言8-14
• 技术路线图13-14
• 第二章 材料和方法14-21
• 2.1 材料14-15
• 2.1.1 研究对象14
• 2.1.2 主要仪器及试剂14-15
• 2.1.3 实验所需试剂的配置15
• 2.2 实验方法15-21
• 2.2.1 细胞培养15-16
• 2.2.2 共培养体系的建立16-17
• 2.2.3 胃癌细胞株和人胃癌纤维母细胞形态学观察17
• 2.2.4 流式细胞仪检测PD-L1蛋白表达率17-18
• 2.2.5 实时荧光定量PCR（RT-PCR）18-20
• 2.2.6 统计学分析20-21
• 第三章 结果21-31
• 3.1 倒置显微镜观察细胞形态21-23
• 3.1.1 倒置显微镜观察TAF21-22
• 3.1.2 共培养48小时后胃癌细胞形态22-23
• 3.2 流式细胞仪检测PD-L1蛋白表达率23-28
• 3.3 PCR检测PD-L1 mRNA表达28-30
• 3.4 两种细胞间PD-L1表达的差异30-31
• 第四章 讨论31-36
• 第五章 结论36-37
• 5.1 主要结论36
• 5.2 研究展望36-37
• 综述37-45
• 1.1 免疫细胞中的共刺激分子38-39
• 2.1 PD-1/PD-L1的结构，表达，信号传导及生理功能39-40
• 3.1 PD-1/PD-L1通路参与肿瘤细胞的免疫逃逸40-42
• 3.1.1 PD-L1促进肿瘤上皮细胞间质化41
• 3.1.2 PD-1 促进Treg细胞的生成并加强其功能41
• 3.1.3 PD-L1促进效应T细胞凋亡41
• 3.1.4 PD-1 信号影响T细胞的能量代谢41-42
• 3.1.5 诱导CLT细胞的耗竭42
• 4.1 抗PD-1/PD-L1的临床应用42-43
• 5.1 TAF在肿瘤微环境中的作用43-44
• 6.1 展望44-45
• 参考文献45-51
• 在校期间的科研成果51-52
• 致谢52

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1 田坤;肿瘤相关纤维母细胞对MNK45，SGC7901细胞PD-L1表达的影响[D];兰州大学;2016年

本文编号：1013784