去泛素化酶USP3促进肝癌细胞增殖的机制研究

发布时间：2017-10-12 13:29

  本文关键词：去泛素化酶USP3促进肝癌细胞增殖的机制研究

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【摘要】：目的:探讨ubiquitin specific protease 3(USP3)经由murine double minute 2(MDM2),促进肝癌细胞增殖的分子机制,为USP3作为肝癌分子靶向治疗的靶点提供实验依据。方法:1、免疫共沉淀技术检测内源性USP3与MDM2在肝癌细胞株Hep G2和正常肝细胞株HL-7702中以及外源性USP3与MDM2在肝癌细胞株Hep G2中的相互作用情况。2、Western blot技术检测USP3去除MDM2分子上聚泛素化链的类型,以及USP3的两种失活突变体H56A和C168S对MDM2的去泛素化是否有影响。3、Western blot技术检测USP3是否能够稳定Hep G2细胞中MDM2的蛋白水平,以及USP3的两种失活突变体H56A和C168S对USP3稳定MDM2的能力是否有影响。4、Cell Counting Kit 8(CCK8)法检测USP3及USP3的两种失活突变体H56A和C168S对Hep G2细胞增殖的影响,以及加入MDM2抑制剂Nutlin-3后USP3及USP3的两种失活突变H56A和C168S对Hep G2细胞增殖的影响。结果:1、内源性和外源性USP3与MDM2在Hep G2细胞中均具有相互作用,但是内源性USP3与MDM2在HL-7702细胞中几乎没有相互作用。2、USP3能够通过去除MDM2蛋白分子上K48连接的聚泛素化链从而稳定MDM2蛋白,而USP3的两种失活突变体H56A和C168S则不具有此活性。3、USP3能提高Hep G2细胞的增殖而USP3的两种失活突变H56A和C168S不具有此活性,但是当MDM2的抑制剂Nutlin-3存在时USP3也失去提高Hep G2细胞增殖的能力。结论:1、MDM2是USP3的直接靶蛋白。2、USP3介导MDM2分子上K48连接的聚泛素化链的去泛素化以稳定MDM2蛋白。3、USP3通过MDM2促进Hep G2细胞的增殖。
【关键词】：肝癌 USP3 MDM2 细胞增殖
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 引言9-11
• 第一部分 MDM2作为USP3直接靶蛋白的验证11-31
• 1.1 实验材料11-15
• 1.2 实验方法15-28
• 1.3 实验结果28-29
• 1.4 讨论29-31
• 第二部分 USP3通过特异性切除MDM2分子上K48聚泛素链以稳定MDM2蛋白31-40
• 2.1 实验材料31-32
• 2.2 实验方法32-36
• 2.3 实验结果36-38
• 2.4 讨论38-40
• 第三部分 USP3通过MDM2蛋白促进肝癌细胞的增殖40-44
• 3.1 实验材料40-41
• 3.2 实验方法41-42
• 3.3 实验结果42-43
• 3.4 讨论43-44
• 结论44-45
• 参考文献45-50
• 文献综述50-63
• 参考文献57-63
• 中英文对照缩略语词表63-65
• 攻读硕士期间公开发表的论文65-66
• 致谢66-67

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本文编号：1018986