肝癌患者血清DSA结合型糖蛋白的定量蛋白质组学和差异糖蛋白L-Selectin的功能研究

发布时间：2017-10-12 17:04

  本文关键词：肝癌患者血清DSA结合型糖蛋白的定量蛋白质组学和差异糖蛋白L-Selectin的功能研究

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【摘要】：蛋白质糖基化是最重要的翻译后修饰之一,主要涉及信号传导、蛋白翻译调控、蛋白降解、免疫应答、细胞凋亡、机体发育以及许多疾病的病理进程等过程。绝大部分肿瘤标志物都属于糖蛋白,基于糖基化异常的肝癌糖蛋白质组学和糖蛋白标志物的研究越来越引起广泛的关注和重视。本研究应用可以识别多天线和偏二天线糖链结构的DSA通过固相亲和层析富集糖蛋白,通过iTRAQ-2DLC-MS/MS定量蛋白质组学技术建立肝癌血清DSA结合型糖蛋白谱,并从中筛选出差异表达的糖蛋白。研究并探讨L-Selectin糖基化在肝癌细胞黏附中的作用,为肝癌的转移预测和预后评估提供新的思路和线索。第一部分肝癌患者血清DSA结合型糖蛋白的定量蛋白质组学研究本部分研究对肝癌患者血清DSA结合型糖蛋白表达谱进行定量分析。收集肝癌患者及正常人血清,每组各10例血清混合,使用ProteoExtract Albumin/IgG Removal Kit去除血清中的白蛋白和IgG。选用特异性结合多天线和偏二天线糖链结构的DSA通过固相亲和层析富集糖蛋白,层析得率为5%。酶解所得肽段经iTRAQ试剂标记,进行2DLC-MS/MS定量蛋白质组学技术分析。所得数据通过搜索SWISS PROT数据库,一共鉴定到76个糖蛋白(95%可信度)。并以邻近时间点蛋白比值(肝癌组/对照组)1.2或0.8为差异蛋白筛选标准,共鉴定出24个差异蛋白, 其中上调蛋白11个,下调蛋白13个。GO分类发现这些差异糖蛋白主要分布于细胞外基质,参与调控外界刺激、防御反应、损伤反应等生物学过程。IPA通路分析结果显示,这些差异糖蛋白主要涉及受体激活、凝固系统、急性时相反应等信号通路。对部分差异糖蛋白(L-Selectin、Gal-3BP、HRG)采用Western blot、Lectin blot、ELISA进行验证,结果证明质谱结果可靠。第二部分糖基化L-Selectin增加肝癌细胞黏附能力选择L-Selectin作后续研究。本部分研究探讨L-Selectin对肝癌细胞黏附能力的影响。体外添加真核细胞表达或原核细胞表达的L-Selectin,发现真核重组的L-Selectin能增加肝癌细胞黏附能力,而原核重组的L-Selectin对肝癌细胞黏附能力无影响,说明L-Selectin增加肝癌细胞黏附能力需要糖链的存在。结论1.利用DSA固相亲和层析结合iTRAQ技术,建立肝癌患者血清DSA结合型糖蛋白表达谱,并鉴定得到24个潜在的与肝癌相关的糖蛋白标志物。2.体外添加真核重组或原核重组的L-Selectin,发现真核重组的L-Selectin能显著增加肝癌细胞黏附能力。
【关键词】：肝细胞癌 iTRAQ 糖蛋白质组学 糖基化修饰 L-选择蛋白
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.7;R730.43
【目录】：

• 个人简历3-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-11
• 第一部分 肝癌患者血清DSA结合型糖蛋白的定量蛋白质组学研究11-46
• 一、前言11-15
• 二、材料和方法15-28
• 三、结果28-38
• 四、讨论38-41
• 五、参考文献41-46
• 第二部分 糖基化修饰L-Selectin增加肝癌细胞黏附能力46-57
• 一、前言46-47
• 二、材料和方法47-50
• 三、结果50-52
• 四、讨论52-54
• 五、参考文献54-57
• 全文结论57
• 创新点57
• 潜在应用价值57-58
• 中英文缩写索引58-59
• 综述59-70
• 参考文献64-70
• 致谢70-72
• 攻读学位期间发表的学术论文72-73

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本文编号：1019875