胃肠间质瘤甲磺酸伊马替尼耐药细胞株诱导及其生物学特性

发布时间：2017-10-13 17:05

  本文关键词：胃肠间质瘤甲磺酸伊马替尼耐药细胞株诱导及其生物学特性

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【摘要】：目的:甲磺酸伊马替尼(Imatinib Mesylate,IM)是一种蛋白酪氨酸激酶受体抑制剂,是不可切除的原发胃肠道间质瘤(Gastrointestinal Stromal Tumor,GIST)或转移复发患者标准的一线靶向治疗药物,它显著延长了患者的中位生存期。但临床实践表明,GIST患者对IM存在广泛的耐药现象。本研究拟构建对IM继发性耐药的稳定细胞株,探索与GIST继发性IM耐药相关的细胞生物学特征,为构建IM耐药GIST裸鼠模型及耐药逆转提供新线索。方法:1.体外培养胃肠间质瘤细胞株GIST-T1并绘制生长曲线,在生长对数期加入特定浓度的IM,48小时后以无药培养基培养至剩余细胞稳定传代并重复该浓度;细胞稳定后以浓度递增间歇给药方法对GIST重复诱导,直到细胞在50μmol/L IM下稳定生长并将此浓度下能稳定生长的细胞株定义为耐药的细胞株,命名为GIST-T1 IR。利用细胞半数抑制浓度(Half Inhibitory Concentration,IC50)以及耐药指数(Resistance Index,RI)鉴定细胞的耐药程度2.比较GIST-T1与GIST-T1 IR的细胞生物学行为包括细胞形态、细胞周期、倍增时间或增殖倍增速率、细胞迁移能力的差异。结果:1.成功建立了GIST-T1对IM具有4倍耐药的细胞株GIST-T1IR。2.研究GIST-T1与GIST-T1 IR的生物学行为差异分析得出:GIST-T1和GIST-T1 IR其细胞倍增时间平均分别为26.59±1.34小时和33.63±2.82小时,倍增时间延长且P0.05,其差异有统计学意义。HE染色GIST-T1细胞狭长呈梭型且体积较大,细胞为单核或者双核,细胞质颗粒较少。GIST-T1 IR体积略小,细胞核深染,多为双核、三核以上,且核较大,核分裂像明显增多、核质比增加,其细胞质颗粒增多。划痕实验检测其迁移能力表明GIST-T1 IR相较于GIST-T1有更强的迁移能力。CCK-8检测细胞IC50分别为10.5±0.12μmol/L以及42.0±0.32μmol/L增加约为4.0倍,属于低度耐药。流式细胞仪检测细胞周期显示耐药细胞相较于亲本细胞其S期细胞比例16.46%和20.72%。G0/G1期分别为33.45%和39.88%。G2/M期分别为28.48%和19.01%。GIST-T1 IR的S期增加约4.26%以及G0/G1比例增加约6.43%,而G2/M期比例降低约9.47%,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:1.GIST-T1细胞经历25、37.5、50μmol/L的浓度梯度递增诱导,历时六个月,构建的GIST-T1 IR为IM低度耐药细胞株。2.GIST-T1 IR细胞变小、细胞轮廓不规则欠光滑、边界不清。细胞核增多且形态异常、核质比核分裂像增加、细胞颗粒增多。3.IM对GIST-T1 IR细胞的抑制能力减弱,GIST-T1 IR在IM环境中仍具有较强的迁移能力。4.GIST-T1 IR可能因其能量重分配或自我调节导致其细胞倍增时间延长、细胞周期改变明显。
【关键词】：胃肠间质瘤 耐药细胞株 甲磺酸伊马替尼 耐药诱导
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735
【目录】：

• 中文摘要4-5
• 英文摘要5-7
• 前言7-10
• 材料与方法10-18
• 2.1 细胞株10
• 2.2 主要试剂和仪器10-11
• 2.3 主要溶液和培养基的配置11-13
• 2.4 实验方法13-18
• 2.5 统计学方法18
• 结果18-26
• 3.1 GIST-T1 IR耐药细胞株的建立及鉴定18-21
• 3.2 GIST-T1和GIST-T1 IR生物学行为差异分析21-26
• 3.2.1 GIST-T1和GIST-T1 IR形态学变化21-23
• 3.2.2 细胞生长曲线及倍增时间测定结果23
• 3.2.3 GIST-T1和GIST-T1 IR细胞周期的测定结果23-24
• 3.2.4 细胞划痕实验检测细胞迁移能力结果24-26
• 讨论26-30
• 结论30-31
• 参考文献31-35
• 综述35-41
• 参考文献39-41
• 致谢41

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本文编号：1026040