肝细胞生长因子诱导敏感非小细胞肺癌细胞对EGFR-TKIs耐药及机制的研究

发布时间：2017-10-14 05:19

  本文关键词：肝细胞生长因子诱导敏感非小细胞肺癌细胞对EGFR-TKIs耐药及机制的研究

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【摘要】：目的:本实验组前期研究表明,肝细胞生长因子(hepatocytegrowth factor,HGF)在体外能够诱导敏感非小细胞肺癌(non-small cell lung cancaer,NSCLC)细胞对表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitors,EGFR-TKIs)耐药,HGF 刺激 c-Met 磷酸化可能是敏感肺癌细胞对EGFR-TKIs耐药的重要机制。本研究旨在进一步探讨HGF在裸鼠体内诱导敏感型NSCLC对EGFR-TKIs耐药及耐药机制。方法:选择NSCLC细胞株PC9(EGFR突变型,敏感株)、H292(EGFR野生型,敏感株)及人胚肺成纤维细胞(MRC-5),通过ELISA法检测MRC-5培养上清液中HGF浓度,MTT法检测细胞增殖情况,应用免疫印迹技术检测细胞中c-Met及其下游通道的变化。建立PC-9、H292细胞的裸鼠移植瘤模型,设空白组(C组)、对照组(H组)、吉非替尼组(G组)、吉非替尼+HGF组(HG组),观察肿瘤生长情况,绘制肿瘤生长曲线,称取肿瘤质量,计算抑瘤率。免疫组织化学法检测裸鼠移植瘤组织中c-Met及其下游通道的变化。结果:MRC-5细胞在体外培养时能够分泌HGF,其分泌的HGF能够影响PC9、H292细胞的存活率,并且能够激活PC9、H292细胞中c-Met并影响下游通道蛋白表达。动物实验表明MRC-5细胞和PC9、H292细胞混合接种时,其分泌的HGF能够降低吉非替尼对肿瘤生长的抑制作用,并且在裸鼠体内的肿瘤组织中,激活c-Met及其下游通道蛋白。结论:MRC-5分泌的HGF能够在裸鼠体内诱导敏感肺癌细胞PC-9和H292对吉非替尼产生耐药,HGF可能通过刺激c-Met磷酸化诱导敏感NSCLC细胞对吉非替尼耐药。
【关键词】：肝细胞生长因子 EGFR-TKIs c-Met 耐药 肺肿瘤 裸鼠
【学位授予单位】：延边大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R734.2
【目录】：

• 摘要6-7
• Abstract7-10
• 第一章 引言10-12
• 第二章 实验材料和方法12-18
• 2.1 实验材料12-13
• 2.1.1 细胞株12
• 2.1.2 细胞培养相关试剂12
• 2.1.3 实验药物12
• 2.1.4 Western Blot相关试剂12
• 2.1.5 抗体12
• 2.1.6 实验动物12-13
• 2.2 试剂配制13
• 2.2.1 吉非替尼原料(分子量446.9)13
• 2.2.2 吉非替尼灌胃用药13
• 2.2.3 配制含双抗及10%含胎牛血清DMEM培养液13
• 2.3 实验方法13-17
• 2.3.1 细胞复苏和传代培养13
• 2.3.2 ELISA法检测MRC-5细胞培养上清液中HGF浓度13-14
• 2.3.3 MTT法检测细胞增殖14
• 2.3.4 提取细胞总蛋白14-15
• 2.3.5 BCA蛋白定量15
• 2.3.6 Western Blot检测NSCLC细胞内蛋白表达15-16
• 2.3.7 裸鼠移植瘤模型的建立及药物抑瘤的分析16
• 2.3.8 免疫组织化学检测16-17
• 2.4 统计方法17-18
• 第三章 实验结果18-27
• 第四章 讨论27-30
• 第五章 结论30-31
• 参考文献31-36
• 综述:非小细胞肺癌对EGFR-TKIs耐药机制的研究进展36-44
• 参考文献40-44
• 致谢44

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本文编号：1029212