食管鳞癌细胞中LSD1与mTOR通路相互调控作用研究

发布时间：2017-10-14 05:40

  本文关键词：食管鳞癌细胞中LSD1与mTOR通路相互调控作用研究

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【摘要】：实验目的1.探讨食管鳞癌中LSD1与m TOR通路相互调控关系。2.探讨LSD1抑制剂对食管鳞癌细胞株增殖作用及其分子作用机制,为食管鳞癌的分子靶向治疗提供理论基础。实验方法1.不同食管鳞癌细胞株中LSD1与m TOR通路相关蛋白表达情况。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测不同食管鳞癌细胞株中LSD1及m TOR通路相关蛋白PTEN、p-AKT(ser473)、p-P70S6K、Rictor、Raptor的表达水平。2.LSD1抑制剂对食管鳞癌细胞株TE-1、ECa109细胞增殖的影响。CCK-8法检测LSD1抑制剂处理TE-1、ECa109细胞48h后细胞的增殖变化情况。3.抑制LSD1对mTOR通路相关蛋白和组蛋白表达的影响。用LSD1抑制剂分别处理食管鳞癌细胞株TE-1、ECa109 48h后,Western blot法检测LSD1、PTEN、p-P70S6K及组蛋白H3K4me2的表达水平;用sh RNA-LSD1干扰ECa109细胞中LSD1的表达水平,Western blot法检测检测LSD1、PTEN、Rictor、Raptor、p-p70S6K的表达水平。4.抑制m TOR通路对LSD1的影响。用m TORC1特异性抑制剂雷帕霉素以及ATP竞争性m TORC1/m TORC2双重抑制剂PP242分别处理ECa109细胞,Western blot法检测不同浓度的PP242(0,1,5,10μM)、雷帕霉素(0,50,100,200n M)作用24h后对食管鳞癌细胞ECa109中LSD1、Rictor、Raptor及p-p70S6K等蛋白表达的影响。实验结果1.所选五株食管鳞癌细胞TE-1、ECa109、KYSE450、KYSE750、EC9706均检测到LSD1表达,且LSD1表达存在差异,在ECa109细胞中LSD1表达较高。2.LSD1抑制剂处理后,TE-1、ECa109细胞增殖活力明显减低,并且m TORC1及m TORC2通路相关蛋白表达水平降低;LSD1的表达没有变化,而其底物H3K4的双甲基化水平升高。运用sh RNA-LSD1干扰ECa109细胞中LSD1的表达后m TORC1,m TORC2通路相关蛋白表达水平降低。3.用雷帕霉素以及PP242分别处理ECa109细胞后均检测到LSD1表达水平降低。结论1.LSD1在五株不同食管鳞癌细胞TE-1、ECa109、KYSE450、KYSE750、EC9706中呈激活状态,但激活程度不同。2.LSD1抑制剂对食管鳞癌细胞株TE-1、ECa109有增殖抑制作用。3.食管鳞癌中LSD1与mTOR通路之间存在相互调控作用。LSD1的抑制可以抑制m TOR通路的活性,同时m TOR的抑制也可以抑制LSD1的表达。
【关键词】：LSD1 mTOR 食管鳞癌 Raptor Rictor
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.1
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-12
• 英文缩略词表12-13
• 前言13-22
• 1 食管癌13-14
• 1.1 食管癌的预防、诊断及治疗13-14
• 2 表观遗传学（epigenetics）14-17
• 2.1 DNA水平甲基化15
• 2.2 组蛋白修饰15-17
• 3 LSD1（组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶 1）17-20
• 3.1 LSD1的生物学功能17-18
• 3.2 LSD1与肿瘤的关系18-20
• 3.2.1 LSD1与乳腺癌18-19
• 3.2.2 LSD1与前列腺癌19
• 3.2.3 LSD1与神经母细胞瘤19-20
• 3.2.4 LSD1与其他肿瘤20
• 4 PI3K-PTEN/Akt/mTOR信号通路20-21
• 5 本文研究内容21-22
• 第一章 食管鳞癌细胞中LSD1与mTOR通路相关蛋白的表达情况22-34
• 引言22
• 1 材料和方法22-31
• 1.1 实验材料22-26
• 1.1.1 实验试剂22-24
• 1.1.2 实验仪器24
• 1.1.3 实验试剂配制24-26
• 1.1.4 食管鳞癌细胞株26
• 1.2 实验方法26-31
• 1.2.1 细胞培养26-27
• 1.2.2 蛋白免疫印迹实验27-31
• 2 结果31-32
• 2.1 不同食管鳞癌细胞中LSD1与mTOR通路蛋白表达情况31-32
• 3 讨论32-34
• 第二章 抑制LSD1对食管鳞癌细胞增殖及mTOR通路的影响34-47
• 引言34
• 1 材料与方法34-41
• 1.1 实验材料34-36
• 1.1.1 试剂34-35
• 1.1.2 实验仪器35
• 1.1.3 试剂配制35-36
• 1.2 实验方法36-41
• 1.2.1 血球计数板法计数细胞36
• 1.2.2 CCK-8 法测定细胞增殖抑制率实验36-37
• 1.2.3 细胞总组蛋白提取37-38
• 1.2.4 细胞总蛋白提取38
• 1.2.5 细菌的转化与扩增38
• 1.2.6 质粒提取38-39
• 1.2.7 细胞转染39-40
• 1.2.8 Western blot实验40
• 1.2.9 统计学分析40-41
• 2 实验结果41-45
• 2.1 LSD1抑制剂对TE-1、ECa109细胞增殖的影响41
• 2.2 LSD1抑制剂对食管鳞癌细胞mTOR通路蛋白表达的影响41-42
• 2.3 LSD1抑制剂食管鳞癌细胞中组蛋白的影响42-43
• 2.4 LSD1-shRNA转染效率及其对mTOR通路蛋白表达的影响43-45
• 2.4.1 LSD1-shRNA质粒转染效率43-44
• 2.4.2 ECa109细胞转染LSD1-shRNA后对mTOR通路蛋白的影响44-45
• 3 讨论45-47
• 第三章 抑制mTOR通路对LSD1的影响47-53
• 引言47
• 1 实验材料与方法47-50
• 1.1 实验材料47-49
• 1.1.1 实验试剂47-48
• 1.1.2 实验仪器48
• 1.1.3 试剂配制48-49
• 1.1.4 细胞株49
• 1.2 实验方法49-50
• 1.2.1 细胞增殖抑制实验49
• 1.2.2 Western blot实验49
• 1.2.3 统计学分析49-50
• 2 实验结果50-52
• 2.1 雷帕霉素对LSD1的影响50
• 2.2 PP242对LSD1的影响50-52
• 3 讨论52-53
• 参考文献53-58
• 综述：LSD1与mTOR抑制剂的研究进展58-66
• 1. mTOR抑制剂研究进展58-60
• 2. LSD1抑制剂研究进展60-63
• 参考文献63-66
• 全文总结与展望66-67
• 致谢67-69
• 个人简历69

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本文编号：1029340