缺氧诱导因子2（HIF-2α）在胰腺癌中调控上皮间质转化（EMT）的机制研究

发布时间：2017-10-14 11:09

  本文关键词：缺氧诱导因子2（HIF-2α）在胰腺癌中调控上皮间质转化（EMT）的机制研究

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【摘要】：第一部分缺氧诱导因子2(HIF-2α)在胰腺癌中的表达及临床意义目的研究缺氧诱导因子2(HIF-2α)在胰腺癌和癌旁非癌胰腺组织中的表达,并进一步探究HIF-2α在胰腺癌中的临床意义。方法(1)用免疫组织化学法(immuno histo chemistry,IHC)检测70例胰腺癌患者癌组织和癌旁非癌胰腺组织标本中HIF-2α蛋白的表达。(2)分析70例胰腺癌组织中HIF-2α表达与临床病理因素之间的相关性。(3)用IHC检测70例胰腺癌中上皮钙依赖粘附蛋白(E-cadherin)表达情况,并分析E-cadherin与HIF-2α表达的相关性。结果(1)HIF-2α主要表达于细胞胞质及胞核,在胰腺癌组织中阳性率为67.1%(47/70),在相应非癌胰腺组织中阳性率为11.4%(8/70)。HIF-2α在胰腺癌组织中的阳性率明显高于非癌胰腺组织,两者的差异有统计学意义(χ2=45.549,P0.05),而且HIF-2α的表达与肿瘤分化程度、肿瘤分期及淋巴结转移密切相关,差异均有统计学意义(P0.05)。(2)胰腺癌患者中胰腺癌组织的E-cadherin表达水平(21/70)明显低于相应癌旁正常胰腺组织(43/70),差异有统计学意义(χ2=13.931,P0.05)。(3)胰腺癌组织中HIF-2α的表达与E-cadherin的表达呈负相关关系(Spearman,r=-0.394,P0.05)。结论HIF-2α蛋白在胰腺癌中高表达,并且胰腺癌组织中HIF-2α蛋白的高表达与肿瘤分化程度、肿瘤分期及淋巴结转移密切相关。E-cadherin在胰腺癌组织中低表达,且胰腺癌组织中HIF-2α的表达与E-cadherin的表达呈负相关性,提示在胰腺癌中HIF-2α可能通过调控E-cadherin的表达促进EMT的发生,参与胰腺癌的侵袭及转移。第二部分在胰腺癌细胞中HIF-2α调控EMT的作用及其调控机制研究目的观察在胰腺癌细胞中HIF-2α对上皮间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,emt)的作用,并进一步探讨可能的调控机制。方法(1)构建针对HIF-2α基因的小干扰rna载体和过表达载体,通过慢病毒转染人胰腺癌细胞,采用蛋白质免疫印迹法(western blot)检测靶向调控HIF-2α的效果。(2)在胰腺癌细胞中调控HIF-2α的表达后,通过侵袭实验(cell invasion assay)和划痕实验(wound healing assay)观察HIF-2α对胰腺癌细胞侵袭及迁移能力的影响,并通过western blot检测HIF-2α对emt相关蛋白的作用。(3)在胰腺癌细胞中调控HIF-2α后通过westernblot检测emt相关转录因子twist1/2表达的变化。(4)通过染色质免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation assay,chip)方法研究twist1/2与emt特异性蛋白e-cadherin的作用与位点。(5)在胰腺癌组织中通过ihc检测twist1/2和e-cadherin的表达,分析其相关性。结果(1)上调HIF-2α表达后,胰腺癌细胞的侵袭及转移能力增强,下调HIF-2α表达后胰腺癌细胞的侵袭及转移能力下降。(2)在胰腺癌细胞中HIF-2α调控emt相关蛋白的表达,即上调HIF-2α后,e-caherin表达下降(p0.01),mmp2和mmp9的表达上升(p0.01);下调HIF-2α后,e-caherin表达上升(p0.01),而mmp2和mmp9的表达下降(p0.01)。(3)在胰腺癌细胞中HIF-2α调控twist1/2的表达,twist2可与e-cadherin的启动子区结合。结论在胰腺癌细胞中HIF-2α参与emt的发生发展,促进胰腺癌的侵袭和转移。emt转录因子twist2可与e-cadherin的启动子区结合,HIF-2α可能是通过调控twist2结合e-cadherin,参与胰腺癌emt的发生。
【关键词】：
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.9
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 前言10-15
• 参考文献12-15
• 第一部分HIF-2α在胰腺癌中的表达及临床意义15-26
• 材料15-16
• 方法16-18
• 结果18-22
• 讨论22-24
• 结论24
• 参考文献24-26
• 第二部分 在胰腺癌细胞中HIF-2α调控EMT的作用及其调控机制研究26-45
• 材料26-28
• 方法28-35
• 结果35-41
• 讨论41-43
• 结论43
• 参考文献43-45
• 全文结论45-46
• 综述46-56
• 参考文献53-56
• 全文缩略词56-57
• 攻读学位期间公开发表的论文57-58
• 致谢58-59

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本文编号：1030698