血根碱通过激活活性氧产生诱导头颈癌细胞凋亡的机制研究

发布时间：2017-10-14 16:31

  本文关键词：血根碱通过激活活性氧产生诱导头颈癌细胞凋亡的机制研究

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【摘要】：细胞凋亡,是程序性的细胞死亡。现代研究发现,细胞凋亡过程与多种疾病相关,但是对凋亡机制的研究还不够深入。本文采用整合了DEVD位点的萤火虫荧光素酶报告基因Cyclic Fluc和海肾荧光素酶报告基因PRL TK的双色荧光报告基因系统,对血根碱诱导的头颈癌细胞凋亡的机制进行了一系列的研究。在14种天然化合物药物分别与22B细胞作用后对其进行了双色荧光检测,推测血根碱可以诱导头颈癌细胞凋亡。进而通过对caspase3的蛋白进行了western blot实验确定了血根碱可使Caspase3蛋白表达增强;用不同浓度的血根碱对22B细胞进行了CCK-8细胞增殖实验,确定血根碱浓度的升高对22B细胞增殖的影响;用流式细胞仪检测不同浓度的血根碱作用于22B细胞后细胞凋亡的数目与血根碱浓度的关系。并研究了caspase3活性与血根碱作用浓度的关系;判断血根碱诱导22B细胞凋亡过程的时间依赖性和药物浓度依赖性;此外,研究了ROS与细胞凋亡过程中的作用,以及得出NF-кB细胞通路和JNK细胞通路是本凋亡过程中起调控作用的细胞通路。最后建立了裸鼠肿瘤模型,研究Cyclic Fluc在体的激活和表达。以上研究发现血根碱通过激活活性氧产生诱导头颈癌细胞凋亡,为头颈癌治疗提供了的一种潜在药物。
【关键词】：双色荧光报告系统 细胞凋亡 血根碱 生物发光成像
【学位授予单位】：西安电子科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R739.91
【目录】：

• 摘要5-6
• ABSTRACT6-9
• 符号对照表9-10
• 缩略语对照表10-13
• 第一章 前言13-31
• 1.1 头颈癌及其现状13-14
• 1.2 细胞凋亡简介14-15
• 1.3 细胞凋亡的过程15-16
• 1.4 细胞凋亡的机制与细胞通路16-22
• 1.4.1 活性氧作用机制16-19
• 1.4.2 细胞通路19-22
• 1.5 细胞凋亡的传统检测方法22-23
• 1.6 荧光素酶报告基因23-26
• 1.7 生物发光成像26-27
• 1.7.1 生物发光成像技术的原理26
• 1.7.2 在体生物发光成像技术的应用26-27
• 1.8 血根碱27-29
• 1.8.1 血根碱简介27
• 1.8.2 血根碱的药理作用27-29
• 1.9 本论文的研究意义及内容29-31
• 第二章 材料与方法31-43
• 2.1 实验材料31
• 2.2 细菌和细胞实验31-42
• 2.2.1 细菌接种31-32
• 2.2.2 质粒提取与浓度测定32
• 2.2.3 细胞培养32-34
• 2.2.4 细胞铺板和细胞转染34-35
• 2.2.5 Western blot实验35-39
• 2.2.6 Caspase3活性检测39-40
• 2.2.7 CCK-8 细胞增殖实验40
• 2.2.8 流式细胞术40-41
• 2.2.9 稳定细胞系的筛选41-42
• 2.2.10 活体成像42
• 2.3 本章小结与讨论42-43
• 第三章 血根碱能够22B细胞凋亡43-51
• 3.1 Cyclic Fluc萤火虫荧光素酶报告基因的验证43-44
• 3.1.1 Cyclic Fluc报告基因43
• 3.1.2 Cyclic Fluc报告基因的验证43-44
• 3.2 药物筛选44-46
• 3.3 Caspase3蛋白表达检测46
• 3.4 CCK-8 细胞增殖实验46-47
• 3.5 流式细胞术47-48
• 3.6 本章小结与讨论48-51
• 第四章 血根碱诱导22B细胞凋亡的机制及活体成像51-59
• 4.1 Caspase3的药物浓度依赖性51
• 4.2 凋亡过程的药物浓度依赖性和时间依赖性51-53
• 4.3 ROS作用机制和信号通路53-55
• 4.3.1 ROS作用机制53-54
• 4.3.2 细胞通路54-55
• 4.4 细胞凋亡的活体成像55-56
• 4.4.1 小鼠体内成像实验55-56
• 4.5 本章小结与讨论56-59
• 第五章 总结与展望59-61
• 参考文献61-69
• 致谢69-71
• 作者简介71-72

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 易健;舒徐;;活性氧对细胞凋亡和增殖的调控作用[J];基础医学与临床;2013年10期

2 曹东旭;元英进;;槐果碱对人红白血病K562细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用[J];天津科技大学学报;2006年04期

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本文编号：1032087