自交联透明质酸凝胶对胃癌和肝癌细胞转移和增殖抑制作用的研究

发布时间：2017-10-14 19:45

  本文关键词：自交联透明质酸凝胶对胃癌和肝癌细胞转移和增殖抑制作用的研究

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【摘要】：研究目的在体外细胞水平,阐明自交联透明质酸凝胶(Cross-linked hyaluronic acid gel,CHAG)对胃癌和肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭等生物学活动的影响及其机制。在动物活体水平,进一步阐明自交联透明质酸凝胶对胃癌和肝癌细胞定植、生长和转移的影响,进而明确CHAG是否可以用于防止腹部肿瘤切除术后的肠道粘连。研究方法以胃癌细胞株AGS和肝癌细胞株Hep G2作为研究对象;采用Transwell实验和MTT实验在体外水平研究CHAG对细胞迁移、侵袭及增殖活动的的影响;采用腹腔移植瘤裸鼠模型实验,观察CHAG对肿瘤细胞定植、生长和转移的影响;采用Western Blotting、Pull-down assay和si RNA干扰等方法探讨CHAG对肿瘤细胞上述生物学活动的作用机制。研究结果Transwell实验结果表明,CHAG抑制表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)诱导的胃癌和肝癌细胞的迁移和侵袭活动。MTT实验结果表明,CHAG抑制EGF诱导的胃癌和肝癌细胞的增殖活动。腹腔移植瘤裸鼠模型实验结果表明,CHAG抑制胃癌和肝癌细胞在腹腔的定植和增殖。Pull-down assay结果表明,CHAG抑制溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid,LPA)诱导的Rho A激活和EGF诱导的Rac1激活。Western Blotting实验结果表明,CHAG通过抑制表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的激活,阻断EGF/EGFR诱导的MAPK/ERK和PI3K/Akt通路的信号转导,减少EGF诱导的MMP2和PCNA的表达。此外,CHAG对包括整合素(Integrin)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在内的其它细胞膜受体的激活也有抑制作用。si RNA实验的结果表明,当透明质酸受体(CD44或RHAMM)的表达被干扰时,CHAG的上述抑制的作用仍然存在,表明CHAG并非通过与HA受体结合而发挥其抑制作用,提示CHGA可能通过物理性黏附而阻断生长因子与其受体的结合,进而发挥抑癌作用。结论CHAG可以抑制胃癌和肝癌细胞的生长和转移,该作用可能是通过CHAG物理性地覆盖在细胞表面,阻断配体与受体的结合而实现的。
【关键词】：自交联透明质酸凝胶 迁移 侵袭 增殖 胃癌 肝癌
【学位授予单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R73-3
【目录】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-13
• 第一章 绪论13-21
• 1.1 HA的研究背景13-19
• 1.1.1 透明质酸的结构、合成与分解13-14
• 1.1.2 透明质酸的主要功能14
• 1.1.3 透明质酸的受体14-15
• 1.1.4 透明质酸与肿瘤的联系15-19
• 1.2 研究目的19
• 1.3 研究内容和技术路线19-21
• 1.3.1 研究内容19-20
• 1.3.2 技术路线20-21
• 第二章 CHAG对胃癌和肝癌细胞增殖、迁移和侵袭等生物学活动的影响21-36
• 2.1 材料与方法21-27
• 2.1.1 材料21-25
• 2.1.2 方法25-27
• 2.2 结果27-33
• 2.2.1 CHAG抑制由EGF/EGFR启动的迁移活动27-28
• 2.2.2 CHAG抑制由EGF/EGFR启动的侵袭活动28-29
• 2.2.3 CHAG抑制由EGF/EGFR启动的增殖活动29-30
• 2.2.4 CHAG抑制由EGF/EGFR启动的Rac1的活化30-31
• 2.2.5 CHAG抑制由EGF/EGFR启动的MMP2的表达31-32
• 2.2.6 CHAG抑制由EGF/EGFR启动的PCNA的表达32-33
• 2.3 讨论33-36
• 第三章 CHAG对胃癌和肝癌细胞定植和腹腔移植瘤生长的影响36-46
• 3.1 材料与方法36-37
• 3.1.1 材料36
• 3.1.2 方法36-37
• 3.2 结果37-44
• 3.2.1 CHAG对胃癌和肝癌细胞在腹腔定植的影响37-40
• 3.2.2 CHAG对胃癌和肝癌细胞在腹腔增殖的影响40-44
• 3.3 讨论44-46
• 第四章 CHAG对胃癌和肝癌细胞表面主要受体及相关信号分子的影响46-59
• 4.1 材料与方法46-48
• 4.1.1 材料46-47
• 4.1.2 方法47-48
• 4.2 结果48-56
• 4.2.1 CHAG阻断EGF诱导的与PI3K/Akt通路相关的EGFR Tyr 1173 位点的磷酸化48-49
• 4.2.2 CHAG抑制EGF/EGFR诱导的PI3K/Akt通路中的Akt（Ser473）的磷酸化49-50
• 4.2.3 CHAG阻断EGF诱导的与MAPK/ERK通路相关的EGFR Tyr1068位点的磷酸化50-51
• 4.2.4 CHAG抑制EGF/EGFR诱导的MAPK/ERK通路中的Erk1/2（T202/Y204）的磷酸化51-52
• 4.2.5 CHAG阻断LPA诱导的Rho A的活化52-53
• 4.2.6 CHAG阻断FN诱导的Integrin β1 的磷酸化53-54
• 4.2.7 CHAG阻断VEGF诱导的VEGFR2的磷酸化54
• 4.2.8 siRNA干扰CD44表达后对CHAG抑制EGFR磷酸化的影响54-55
• 4.2.9 siRNA干扰RHAMM表达后对CHAG抑制EGFR磷酸化的影响55-56
• 4.3 讨论56-59
• 第五章 结论与展望59-60
• 5.1 主要结论59
• 5.2 展望59-60
• 参考文献60-72
• 致谢72-74
• 硕士期间发表的学术论文74

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本文编号：1032852