mTORC2抑制致肝癌细胞周期阻滞及MDR1下调

发布时间：2017-10-16 05:23

  本文关键词：mTORC2抑制致肝癌细胞周期阻滞及MDR1下调

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【摘要】：哺乳动物雷帕霉素受体(mTOR)在人类肝细胞肝癌(HCC)中异常活化,在肝癌肿瘤生成及化疗耐药方面起着至关重要的作用。雷帕霉素作用于哺乳动物雷帕霉素受体复合物1(mTORCl),在肝癌中不仅能起到抗肿瘤作用,而且能增强肝癌细胞对细胞毒性药物的敏感性。然而,mTORCl抑制引起的负反馈作用会导致蛋白激酶B (PKB/AKT)的激活,因此同时针对mTORCl和mTORC2的抑制可能可以起到更好的抗肿瘤效应。 本研究通过体内和体外实验,探究mTORCl/2双重抑制剂OSI-027和多柔比星联合治疗肝癌时的相互作用及其机制。我们发现OSI-027可同时下调mTORCl和mTORC2底物的磷酸化,包括4E-BP1. p70S6K及AKT(Ser473),抑制肝癌细胞的增殖；OSI-027处理或沉默mTORC2基因均可导致肝癌细胞发生G0/G1期细胞周期阻滞。相反,雷帕霉素处理或沉默mTORCl基因会导致AKT (Ser473)磷酸化水平的上调,对肝癌细胞则几乎没有抗增殖作用。体外实验中,OSI-027通过下调多药耐药相关蛋白1(MDR1)的表达,与多柔比星协同杀伤肝癌细胞；在裸鼠异种移植物模型中,OSI-027与多柔比星可以起到类似的协同抗肝癌作用。此外,我们还发现OSI-027所致的细胞周期阻滞及MDR1下调中均依赖AKT的活性。 本研究为诸如OSI-027之类的mTORCl/2双重抑制剂作为单药或与细胞毒性药物联合治疗肝细胞肝癌提供了依据。
【关键词】：肝细胞肝癌 HCC OSI-027 哺乳动物雷帕霉素受体 mTOR 蛋白激酶B AKT 细胞周期 多药耐药相关蛋白1 MDR1
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 致谢4-5
• 中文摘要5-7
• Abstracts7-9
• 插图和附表清单9-10
• 缩略词表10-14
• 1 前言14-16
• 2 研究材料与方法16-20
• 2.1 细胞系与细胞培养16
• 2.2 实验试剂和抗体16
• 2.3 细胞活力和增殖检测16-17
• 2.4 胞凋亡和周期分析17
• 2.5 药物联合指数分析17
• 2.6 RNA干扰实验17-18
• 2.7 实时荧光定量PCR18
• 2.8 WESTERN BLOT免疫印迹18
• 2.9 体内实验18-20
• 3 结果20-33
• 3.1 OSI-027对肝癌细胞存在剂量依赖性的生长抑制作用20-21
• 3.2 OSI-027同时抑制肝癌细胞MTORC1和MTORC2信号通路21-23
• 3.3 OSI-027诱导肝癌细胞出现周期阻滞23-25
• 3.4 G_0/G_1期周期阻滞源于MTORC2抑制25-26
• 3.5 OSI-027逆转多柔比星诱导的MDR1上调与多柔比星起协同作用26-31
• 3.6 OSI-027和多柔比星联用有效抑制肝癌异种移植物的肿瘤生长31-32
• 3.7 OSI-027诱导肝癌细胞周期阻滞及MDR1下调依赖AKT活性32-33
• 4 讨论33-37
• 5 结论37-38
• 参考文献38-44
• 综述44-58
• 参考文献52-58
• 作者简历58

【共引文献】

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1 吴穷;李玉梅;汪蕊;谈q，

本文编号：1040862