体外多胺微环境对人肝癌细胞HepG2和SMMC-7721迁移的影响

发布时间：2017-10-16 09:41

  本文关键词：体外多胺微环境对人肝癌细胞HepG2和SMMC-7721迁移的影响

  更多相关文章： 肝癌 多胺 Akt1 迁移 增殖

【摘要】：实验背景:肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是常见的一种恶性肿瘤,在全世界范围内,亦是发病率和致死率最高的肿瘤之一,其致死率在肿瘤疾病中位居第三位。虽然近年来使用早期诊断、化疗、放疗和手术治疗等方法使肝癌的疗效有一定的提高,但是肝癌患者的预后仍不理想。多胺是一类带正电荷的小分子脂肪族化合物,包括腐胺(putrescine,Put)、亚精胺或精脒(spermidine,Spd)和精胺(spermine,Spm),是生命活动中不可或缺的生命物质,具有广泛的生理及病理生理作用,如促进细胞分裂增殖、分化以及凋亡等。最近有文章显示体内多胺含量的变化和Akt1的高表达密切相关,但是在肝癌中多胺和Akt1的生物学功能及分子机制仍然不清楚。实验目的:多胺是一种带正电荷的小分子脂肪族化合物,包括腐胺(putrescine,Put)、亚精胺(spermidine,Spd)和精胺(spermine,Spm)。它广泛存在于自然界中,例如:动植物细胞、细菌、原核细胞、酵母菌和病毒中都含有一定的多胺,它是大多数生命器官天然组份中所必需的。在正常生理情况下,多胺在人体组织和体液中的含量非常少;而在病变的肿瘤组织中多胺的含量明显高于正常组织,并且肿瘤的生长、侵袭和迁移均与细胞内多胺的含量有关。本实验通过采用低、中、高三种不同浓度的多胺处理肝癌细胞,观察多胺微环境对肝癌细胞生长、迁移、侵袭等能力的影响,并探究其相关分子作用机制。实验方法:选取人肝癌细胞Hep G2和SMMC-7721作为研究对象,首先用基因转染技术把Akt1基因转入Hep G2细胞和SMMC-7721细胞中,将三种不同浓度的外源性多胺按低浓度(腐胺0.008 nmol/m L、精胺0.05 nmol/m L、精脒0.1nmol/m L)、中浓度(腐胺0.08nmol/m L、精胺0.5 nmol/m L、精脒1.0 nmol/m L)和高浓度(腐胺0.8 nmol/m L、精胺5.0 nmol/m L精脒10.0 nmol/m L)分别加入含定量培养基的Hep G2细胞、Hep G2-Akt1细胞、SMMC-7721细胞和SMMC-7721-Akt1细胞中。每一种细胞都设阴性对照组,培养15天和30天。采用细胞划痕实验和Transwell迁移实验(未铺胶)检测不同浓度的多胺对四种细胞迁移能力的影响;采用克隆形成实验检测不同浓度的多胺对四种细胞增殖能力的影响;采用蛋白免疫印迹实验(Western blot)检测Akt1、Akt、基质金属蛋白酶(MMP9)、鸟氨酸脱羧酶(ornithine decarbo-xylase,ODC)、低氧诱导因子(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)、P27kip1、整合素(Integrinα6)、精脒/精胺乙酰转移酶(spermidine/spermine N1-acetyltransferase,SSAT)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)等蛋白在不同浓度多胺微环境下的变化。实验结果:Hep G2细胞、Hep G2-Akt1细胞、SMMC-7721细胞和SMMC-7721-Akt1细胞在不同浓度多胺微环境下表现出不同的增殖、侵袭和迁移能力,并且随着多胺浓度的升高其增殖、侵袭和迁移能力逐渐增强,并且表现出时间剂量依赖性。蛋白免疫印迹实验结果表明多胺可通过诱导鸟氨酸脱羧酶(ODC)、精脒/精胺乙酰转移酶(SSAT)、Akt1、整合素(Integrinα6)、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶(MMP9)、低氧诱导因子(HIF-1α)等蛋白的表达上调以及下调P27kip1蛋白表达促进肿瘤细胞的增殖、侵袭及转移。实验结论:高浓度多胺微环境促进Hep G2细胞、Hep G2-Akt1细胞、SMMC-7721细胞和SMMC-7721-Akt1细胞增殖、侵袭和迁移等能力,并且Hep G2-Akt细胞和SMMC-7721-Akt1细胞的增殖、侵袭和迁移能力明显高于Hep G2细胞和SMMC-7721细胞,表明Akt1于多胺微环境条件下在促进肿瘤迁移的过程中发挥着重要作用。
【关键词】：肝癌 多胺 Akt1 迁移 增殖
【学位授予单位】：河南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-10
• 第一章 文献综述10-18
• 1 引言10-11
• 2 多胺在肿瘤中的研究11-14
• 2.1 多胺的生物功能11-12
• 2.2 多胺的代谢12-13
• 2.3 多胺与肿瘤13-14
• 3 Akt在肿瘤中的研究14-18
• 3.1 Akt的结构14-15
• 3.2 Akt的功能15
• 3.3 Akt与肿瘤15-18
• 第二章 实验材料、试剂和仪器18-24
• 1 实验材料18
• 1.1 肿瘤细胞株18
• 1.2 Akt1高表达细胞株18
• 2 实验试剂及主要溶液的配制18-21
• 2.1 实验试剂18-19
• 2.2 主要溶液的配制19-21
• 3 实验仪器21-24
• 第三章 实验方法24-32
• 1 细胞培养24-25
• 1.1 细胞株的复苏24
• 1.2 细胞株的培养24
• 1.3 细胞多胺微环境下的培养24-25
• 2 Western Blot检测蛋白的表达25-27
• 2.1 Western Blot检测Akt1蛋白的表达25-27
• 2.2 Western Blot检测侵袭、转移蛋白的表达27
• 3 细胞迁移能力的检测27-29
• 3.1 细胞划痕实验27-28
• 3.2 Transwell实验28-29
• 4 细胞单克隆形成实验29-30
• 5 统计学分析30-32
• 第四章 实验结果32-50
• 1 Akt1高表达验证结果32
• 2 体外多胺微环境对细胞运动能力的影响32-40
• 2.1 划痕实验结果32-37
• 2.2 Transwell实验37-40
• 3 体外多胺微环境对细胞克隆形成能力的影响40-46
• 4 体外多胺微环境对转移相关蛋白的影响46-50
• 结论50-52
• 讨论52-56
• 参考文献56-62
• 附录62-64
• 致谢64-65

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 彭安 ,陈敏珍 ,袁劲松;葛根提取物诱导人肝癌细胞分化的研究[J];现代中西医结合杂志;2002年16期

2 朱文渊,黄济群;丁酸钠对人肝癌细胞诱导分化作用的实验研究[J];中国病理生理杂志;2004年06期

3 马虹,牟翔,李玲,李焰;微波和毫米波抑制人肝癌细胞SMMC-7721生长的研究[J];中国现代医学杂志;2005年12期

4 钟宁,马亚兵,高海青,张志勉,程梅,由倍安,伊永亮,刘新春;大蒜素抑制体外人肝癌细胞的侵袭能力[J];世界华人消化杂志;2005年06期

5 吴银侠;陈新胜;宋少武;王淑媛;;钼酸盐对人肝癌细胞抑制增殖和诱导凋亡作用的实验研究[J];中国现代医学杂志;2012年30期

6 王晓胜;孟维燕;花芹芳;;干扰素α-2b对人肝癌细胞及血管内皮生长因子分泌的抑制作用[J];山东医药;2012年41期

7 彭迁;癌光啉加光辐照对体外人肝癌细胞的杀伤作用[J];第二军医大学学报;1988年01期

8 艾兆伟,查锡■,汤华,陈惠黎;视黄酸对人肝癌细胞的逆转作用——生物学研究[J];生物化学杂志;1990年02期

9 程黎阳,高毅,李全业,杨继霞;反义技术特异抗人肝癌细胞生长的研究[J];解放军医学杂志;1998年06期

10 王丽兰;王秀娟;余水平;李铂;孙彦浩;胡志高;唐博;;D-丙2,D-亮5脑啡肽对人肝癌细胞生长、迁移能力的影响及机制研究[J];实用医学杂志;2014年08期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 甘璐;杨祥良;徐辉碧;;硫氧还蛋白还原酶反义RNA对人肝癌细胞作用的研究[A];第六届全国自由基生物学与自由基医学学术会议和海峡两岸自由基生物学与自由基医学学术会议论文集[C];2004年

2 王文奇;刘倩;时昌文;徐瀚峰;吴洪文;;生长抑素对人肝癌细胞生物学行为影响的研究[A];中华医学会第七次全国消化病学术会议论文汇编（上册）[C];2007年

3 王迎春;刘炎芳;邢兰花;杨旭;李小欢;;曲古抑菌素A对人肝癌细胞周期及增殖凋亡影响的研究[A];第7届全国疑难及重症肝病大会论文集[C];2013年

4 王秋艳;马小军;袁权;;微囊化人肝癌细胞的极性重建[A];第一届全国化学工程与生物化工年会论文摘要集(下)[C];2004年

5 田媛;白文元;冯子南;刘云燕;陈庆;;三羟异黄酮抑制人肝癌细胞SMMC-7721侵袭转移的实验研究[A];中华医学会第七次全国消化病学术会议论文汇编（下册）[C];2007年

6 刘珊林;刘冠中;申宗候;施冬云;;氧化还原介导PI3-K/PKB-JNK信号通路串话调节人肝癌细胞生长[A];第九次全国生物物理大会学术会议论文摘要集[C];2002年

7 崔杰峰;刘银坤;宋海燕;张子;孙瑞霞;陈洁;冯钜涛;于雁灵;申华丽;杨們原;;人肝癌细胞转移相关分子的比较表达蛋白质组学分析[A];中国蛋白质组学首届学术大会论文摘要集[C];2003年

8 邵勤;官阳;周泽斌;;血小板衍生生长因子对人肝癌细胞的促生长作用[A];中南地区第十六届电子显微镜学术交流会论文集[C];2007年

9 王秋艳;马小军;袁权;;海藻酸钠/聚赖氨酸微胶囊用于人肝癌细胞三维培养[A];中国细胞生物学学会2005年学术大会、青年学术研讨会论文摘要集[C];2005年

10 冯子南;白文元;刘云燕;田媛;;三羟异黄酮抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖及其机制的研究[A];中华医学会第七次全国消化病学术会议论文汇编（下册）[C];2007年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 叶震敏;裂解型腺病毒基因治疗人肝癌细胞及其转移瘤的体内外实验研究[D];苏州大学;2006年

2 李雁;转移性人肝癌细胞模型的优化及转移机理探讨[D];复旦大学;2002年

3 马栋柱;人肝癌细胞抑癌基因PTEN的表达及其启动子的调控研究[D];复旦大学;2004年

4 殷鹏;PI3K/Akt信号通路对人肝癌细胞中胱硫醚-γ-裂解酶基因表达调控的分子机制及其生物学功能的研究[D];复旦大学;2012年

5 杨闯;Beclin 1沉默对维生素K_3诱导的人肝癌细胞损伤的影响[D];吉林大学;2009年

6 王文奇;EGF、雌二醇和生长抑素对人肝癌细胞生物学行为影响的研究[D];山东大学;2006年

7 马秋野;脱落酸对SMMC-7721人肝癌细胞诱导分化的实验研究[D];昆明医学院;2006年

8 李苏宜;重组人生长激素干预GHR不同表达水平人肝癌细胞的实验研究[D];郑州大学;2010年

9 郑科;CXCL12/CXCR7调节人肝癌细胞侵袭和血管生成能力的实验研究[D];重庆医科大学;2010年

10 孟玫;组蛋白去乙酰化酶抑制剂对人肝癌细胞的诱导分化及其机制的研究[D];山东大学;2005年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 邵荣江;丁酸钠对人肝癌细胞凋亡诱导作用的研究[D];武汉大学;2004年

2 吴捷;肿瘤坏死因子-α诱导的人肝癌细胞中蛋白酪氨酸磷酸酶1B表达变化的研究[D];第二军医大学;2007年

3 艾小佳;水蛭、土鳖虫提取物对人肝癌细胞侵袭、转移能力的影响及机制研究[D];湖南中医药大学;2012年

4 吴航;苦参碱对人肝癌细胞SMMC-7721的影响及分子机制[D];浙江大学;2009年

5 冯子南;三羟异黄酮抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖及其机制的研究[D];河北医科大学;2006年

6 姚彬;重组pAd/CMV/V5-DEST-p16载体的构建及其对人肝癌细胞的抑制作用[D];安徽医科大学;2006年

7 徐淑萍;丹皮酚增强化疗药物对人肝癌细胞的增殖抑制作用及其可能机制[D];安徽医科大学;2006年

8 王昊;微囊藻毒素LR对人肝癌细胞SMMC-7721的作用研究[D];浙江大学;2012年

9 张磊;维A酸注射液对裸鼠人肝癌细胞SMMC-7721移植瘤的抑制作用[D];泸州医学院;2012年

10 邵勤;血小板衍生生长因子在人肝癌细胞中的表达及意义[D];华中科技大学;2007年

，

本文编号：1041966