二甲双胍对膀胱癌增殖的抑制作用及机制研究

发布时间：2017-10-16 10:28

  本文关键词：二甲双胍对膀胱癌增殖的抑制作用及机制研究

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【摘要】：目的:初步探讨降糖药物二甲双胍对膀胱肿瘤细胞的抑制作用及其相关机制。方法:1.采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)试剂盒分析二甲双胍对膀胱肿瘤细胞增殖的影响;2.应用流式细胞仪检测二甲双胍对细胞周期的影响。3.通过免疫印迹方法检测相关蛋白确定可能参与其中的信号分子;4.裸鼠右侧腋窝皮下接种膀胱癌T24细胞,以建立膀胱癌的裸鼠皮下移植瘤模型;药物处理组将二甲双胍以200mg/kg/day注射裸鼠腹腔内,观察其对裸鼠食量、体重和膀胱癌皮下移植瘤的影响。5.应用免疫组织化学染色法检测膀胱癌皮下移植瘤细胞内Ki67、VEGF、CD31表达的影响。结果:1.在各时间点(24小时,48小时,72小时)二甲双胍处理组与对照组相比膀胱肿瘤细胞的增殖受到明显抑制(P0.01或P0.05);2.与对照组比较,二甲双胍处理组G0/G1期细胞比例上升,S期细胞比例下降(P0.01或P0.05)。3.免疫蛋白印迹发现,二甲双胍处理组中的磷酸化AMP激活的蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)表达升高,同时细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的表达下降(P0.01或P0.05)。4.二甲双胍显著抑制膀胱癌皮下移植瘤的生长并减轻瘤重,裸鼠体重和饮食情况并未受到影响;5.二甲双胍处理组移植瘤内Ki67、VEGF和CD31阳性比例较对照组下降。结论:1.体外实验中二甲双胍能够明显抑制膀胱肿瘤细胞的增殖,通过下调cyclin D1的表达诱导细胞周期停滞于G0/G1期。2.体内实验中,二甲双胍抑制膀胱癌移植瘤的生长和成血管作用。这些结果表明二甲双胍可能成为治疗膀胱癌的潜在药物。
【关键词】：二甲双胍 膀胱癌 AMP激活的蛋白激酶 细胞周期 细胞周期蛋白D1 血管内皮生长因子
【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.14
【目录】：

• 摘要5-6
• ABSTRACT6-10
• 缩略词10-11
• 前言11-14
• 第一部分 二甲双胍对膀胱癌细胞体外增殖的作用和机制研究14-32
• 1 材料和方法14-24
• 1.1 实验材料14-16
• 1.1.1 细胞株14
• 1.1.2 实验试剂14-15
• 1.1.3 主要实验仪器15-16
• 1.2 实验方法16-23
• 1.2.1 主要试剂的配制16-17
• 1.2.2 细胞培养17-18
• 1.2.3 CCK-8 检测二甲双胍对膀胱癌细胞体外增殖的影响18-19
• 1.2.4 流式细胞术检测细胞周期19
• 1.2.5 Western blot检测相关蛋白19-23
• 1.3 统计学处理23-24
• 2 结果24-27
• 2.1 二甲双胍抑制膀胱肿瘤细胞的增殖24-25
• 2.2 二甲双胍诱导膀胱肿瘤细胞出现G0/G1周期阻滞25-26
• 2.3 二甲双胍激活膀胱癌细胞中的AMPK并下调cyclin D1蛋白的表达26-27
• 3 讨论27-31
• 4 结论31-32
• 第二部分 二甲双胍抑制膀胱癌裸鼠皮下移植瘤生长及血管化的研究32-49
• 1 材料和方法32-40
• 1.1 实验材料32-34
• 1.1.1 细胞株32
• 1.1.2 实验动物来源及饲养条件32
• 1.1.3 主要实验仪器32-33
• 1.1.4 主要试剂及材料33-34
• 1.2 实验方法34-40
• 1.2.1 膀胱癌细胞株T24的复苏和培养34
• 1.2.2 膀胱癌裸鼠皮下移植瘤模型的构建以及二甲双胍的干预34-35
• 1.2.3 制作组织蜡块35-36
• 1.2.4 HE染色操作步骤36-37
• 1.2.5 免疫组织化学染色法检测裸鼠皮下移植瘤中相关蛋白的表达37-40
• 1.3 统计学分析40
• 2 结果40-46
• 2.1 裸鼠皮下膀胱癌移植瘤模型的建立40-41
• 2.2 二甲双胍对荷瘤裸鼠一般状况的影响41-42
• 2.3 二甲双胍对膀胱癌裸鼠皮下移植瘤体积及重量的影响42-43
• 2.4 膀胱癌裸鼠皮下移植瘤的组织形态学特征43-44
• 2.5 二甲双胍抑制膀胱癌裸鼠皮下移植瘤Ki67、VEGF和CD31的表达44-46
• 3 讨论46-48
• 4 结论48-49
• 参考文献49-59
• 附录 二甲双胍在肿瘤治疗中的研究进展59-70
• 致谢70-72
• 在读期间发表论文72

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本文编号：1042193