NVP-BKM120联合NVP-RAD001对三阴性乳腺癌干细胞作用研究

发布时间：2017-10-16 21:34

  本文关键词：NVP-BKM120联合NVP-RAD001对三阴性乳腺癌干细胞作用研究

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【摘要】：目的:1.探究特异性靶向PI3K的抑制剂NVP-BKM120对三阴性乳腺癌细胞系中普通细胞及相应干细胞的杀伤作用,观察NVP-BKM120对三阴性乳腺癌细胞系中干细胞生长、增殖等生物学特性的影响。2.探究NVP-BKM120联合特异性靶向mTOR的抑制剂NVP-RAD001对三阴性乳腺癌系中普通细胞及相应干细胞的杀伤作用,观察NVP-BKM120与NVP-RAD001双靶向联合对三阴性乳腺癌细胞系中干细胞生长、增殖等生物学特性的影响。3.探究NVP-BKM120联合NVP-RAD001对裸鼠干细胞移植瘤生长增殖的影响,为临床双靶向联合治疗三阴性乳腺癌提供依据。方法:1.体外细胞学实验部分:通过采用无血清干细胞培养液悬浮培养、富集三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231、CAL51中的干细胞,并通过流式细胞仪检测其中ESA+CD44+CD24-/low亚群比例。通过MTT分析法检测常规培养条件以及悬浮培养条件下,NVP-BKM120单药、NVP-BKM120联合NVP-RAD001对三阴性乳腺癌细胞系中普通细胞及其干细胞的生长增殖抑制作用;通过计算药物作用联合指数分析研究NVP-BKM120与NVP-RAD001是否具有协同增效作用;通过耐药细胞平板克隆实验检测NVP-BKM120单药、NVP-BKM120联合NVP-RAD001对三阴性乳腺癌细胞克隆形成能力的影响;通过球囊形成抑制实验检测悬浮培养条件下,NVP-BKM120单药或NVP-BKM120联合NVP-RAD001对三阴性乳腺癌干细胞球囊形成能力的影响;通过免疫蛋白印迹法检测NVP-BKM120单药或联合NVP-RAD001对三阴性乳腺癌细胞中PI3K/AKT/mTOR信号通路中关键节点的蛋白活化水平的影响。2.裸鼠干细胞移植瘤实验:通过无血清悬浮培养富集三阴性乳腺癌干细胞,建立裸鼠三阴性乳腺癌干细胞移植瘤模型并随即分为4个实验组,分别予以安慰剂、NVP-BKM120、NVP-RAD001或联合用药,记录给药期间干细胞移植瘤体积变化以及裸鼠体重变化情况,观察体内实验条件下,药物对三阴性乳腺癌干细胞的作用。结果:1.体外实验条件下,NVP-BKM120联合NVP-RAD001对三阴性乳腺癌普通细胞及干细胞作用效果:通过对照组、NVP-BKM120组、NVP-RAD001组以及联合用药组之间的比较,在一定程度上,单药NVP-BKM120或NVP-RAD001均能够抑制三阴性乳腺癌普通细胞及其干细胞生长增殖,并且随药物浓度的增大,其抑制作用增强。相比于普通细胞,干细胞对任一单药具有耐药性。通过与对照组、单药组之间的比较,NVP-BKM120联合NVP-RAD001能够明显抑制三阴性乳腺癌普通细胞及其干细胞的生长、增殖,减少普通细胞耐药克隆形成与干细胞球囊形成,同时能够明显抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白pAKT、pS6表达水平进而抑制信号传导。药物联合指数计算显示NVP-BKM120与NVP-RAD001之间具有协同增效作用。2.体内实验条件下,NVP-BKM120联合NVP-RAD001对三阴性乳腺癌干细胞移植瘤的作用效果:通过对照组、NVP-BKM120组、NVP-RAD001组以及联合用药组之间的比较,在未明显降低裸鼠体重的前提下,NVP-BKM120联合NVP-RAD001能够明显减缓三阴性乳腺癌干细胞移植瘤的生长速度。结论:1.PI3K的抑制剂NVP-BKM120联合靶向mTOR的抑制剂NVP-RAD001能够协同抑制三阴性乳腺癌普通细胞及干细胞的生长、增殖,减少普通细胞耐药克隆形成与干细胞球囊形成,阻断PI3K/AKT/mTOR信号通路关键蛋白分子AKT、S6的磷酸化,从而抑制该通路信号传导。2.PI3K的抑制剂NVP-BKM120联合靶向mTOR的抑制剂NVP-RAD001能够有效抑制裸鼠三阴性乳腺癌干细胞移植瘤的生长。
【关键词】：三阴性乳腺癌 干细胞 NVP-BKM120 NVP-RAD001 分子靶向治疗
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.9
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 缩略语/符号说明10-11
• 前言11-16
• 研究现状、成果11-14
• 研究目的、方法14-16
• 对象和方法16-27
• 1.1 实验材料16-18
• 1.1.1 实验对象16
• 1.1.2 实验试剂16-17
• 1.1.3 实验仪器17-18
• 1.2 实验方法18-26
• 1.2.1 MDA-MB-231，Cal51乳腺癌细胞系培养18
• 1.2.2 MDA-MB-231，Cal51乳腺癌细胞系干细胞培养18-19
• 1.2.3 MTT分析法19-20
• 1.2.4 耐药细胞平板克隆实验20
• 1.2.5 球囊形成实验20-21
• 1.2.6 干细胞比例检测21
• 1.2.7 蛋白免疫印迹实验(Western blotting)21-25
• 1.2.8 干细胞移植瘤模型建立及药物干预25-26
• 1.3 统计学方法26-27
• 实验结果27-34
• 2.1 NVP-BKM120、NVP-RAD001对三阴性乳腺癌普通细胞以及干细胞的生长抑制作用27-28
• 2.2 NVP-BKM120联合NVP-RAD001具有协同增效作用28-29
• 2.3 NVP-BKM120联合NVP-RAD001抑制三阴性乳腺癌细胞耐药克隆的形成29-30
• 2.4 NVP-BKM120联合NVP-RAD001进一步抑制三阴性乳腺癌细胞球囊形成30-31
• 2.5 NVP-BKM120联合NVP-RAD001抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路31-32
• 2.6 NVP-BKM120联合NVP-RAD001抑制干细胞移植瘤的生长32-34
• 讨论34-37
• 结论37-38
• 参考文献38-43
• 发表论文和参加科研情况说明43-44
• 综述 NVP-BKM120在乳腺癌治疗中的研究进展44-53
• 综述参考文献50-53
• 致谢53-54
• 个人简历54

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本文编号：1045055