米非司酮（RU486）下调孕酮诱导阻断因子的表达抑制乳腺癌MCF-7细胞生长

发布时间：2017-10-20 19:21

  本文关键词：米非司酮（RU486）下调孕酮诱导阻断因子的表达抑制乳腺癌MCF-7细胞生长

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【摘要】：孕酮诱导阻断因子(progesterone induced blocking factor,PIBF)是妊娠期间由孕酮诱导产生,介导孕酮的免疫反应。服用米非司酮,也称RU486后,孕妇体内PIBF水平下降,胎儿流产率增加。PIBF在部分肿瘤细胞及组织中过度表达。RU486可以抑制乳腺癌细胞的生长,但是RU486所引起的肿瘤生物学行为的改变是否与PIBF有关,目前并不清楚。本论文通过RU486作用PR阳性的MCF-7细胞,研究肿瘤细胞生物学行为,探讨PIBF的改变,为丰富RU486的抗肿瘤机制提供新的线索。结果显示,RU486可以改变细胞形态,使细胞胞体变小,凸起变长,贴壁不好且易脱落。可以抑制MCF-7细胞增殖,并且有浓度和时间依赖,24h、48h和72h的半数抑制浓度IC50值分别为:41.15μM、35.47μM和25.74μM。可以使细胞周期阻滞在G1期,诱导细胞凋亡。RU486可以下调PIBF m RNA和蛋白,上调p21和Bax蛋白,下调cdk2,cyclin A和WNT1蛋白。总之,RU486可以抑制乳腺癌MCF-7的生长,可能是通过下调PIBF来发挥作用。
【关键词】：RU486 孕酮诱导阻断因子 乳腺癌
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.9
【目录】：

• 内容提要4-5
• 中文摘要5-8
• Abstract8-14
• 第1章 绪论14-19
• 1.1 抑制细胞增殖14-15
• 1.1.1 RU486与PR依赖关系14-15
• 1.1.2 内质网应激15
• 1.2 诱导细胞周期G1期阻滞15-16
• 1.3 促进细胞凋亡16-18
• 1.3.1 Bcl-2 和Bax16
• 1.3.2 半胱氨酸蛋白酶caspase家族16
• 1.3.3 线粒体凋亡通路16-17
• 1.3.4 MAPKs信号通路17
• 1.3.5 CHOP蛋白17-18
• 1.4 抑制细胞侵袭和迁移18-19
• 第2章 引言19-20
• 第3章 材料与方法20-31
• 3.1 材料20-23
• 3.1.1 主要仪器和设备20
• 3.1.2 主要试剂盒耗材20-22
• 3.1.3 主要试剂配制22-23
• 3.2 细胞培养23
• 3.3 CCK-8 法测定细胞增殖23
• 3.4 流式细胞术检测细胞周期23-24
• 3.5 流式细胞术检测细胞凋亡24-25
• 3.6 RT-qPCR检测PIBF基因mRNA的表达25-27
• 3.6.1 RNA的提取25
• 3.6.2 逆转录反应25-26
• 3.6.3 Real-time PCR26-27
• 3.7 Western blot检测相关蛋白水平的表达27-30
• 3.7.1 蛋白的提取27
• 3.7.2 BCA法测定蛋白浓度27-28
• 3.7.3 蛋白变性28
• 3.7.4 制胶28-29
• 3.7.5 上样29
• 3.7.6 电泳29
• 3.7.7 转膜29
• 3.7.8 封闭29
• 3.7.9 抗体孵育29-30
• 3.7.10 显色30
• 3.8 统计学处理30-31
• 第4章 结果31-39
• 4.1 RU486改变MCF-7 细胞形态31-32
• 4.2 RU486抑制MCF-7 细胞增殖32-33
• 4.3 RU486诱导MCF-7 细胞G1期阻滞33-34
• 4.4 RU486促进MCF-7 细胞凋亡34-35
• 4.5 RU486下调PIBF表达35-36
• 4.6 RU486下调WNT1表达36-37
• 4.7 RU486上调p21和Bax，下调cdk2和cyclin A表达37-39
• 第5章 讨论39-44
• 5.1 RU486与细胞增殖39-41
• 5.2 RU486与细胞周期41-42
• 5.3 RU486与细胞凋亡42-44
• 第6章 结论44-45
• 参考文献45-54
• 作者简介及在学期间所取得的科研成果54-55
• 致谢55

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本文编号：1068893