靶向沉默RACK1基因对肺腺癌A549细胞化疗敏感性的影响

发布时间：2017-10-20 18:25

  本文关键词：靶向沉默RACK1基因对肺腺癌A549细胞化疗敏感性的影响

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【摘要】：目的:研究靶向沉默RACK1基因对肺腺癌A549细胞化疗药物敏感性的影响,探讨其可能的作用机制。方法:设计并合成靶向沉默RACK1基因的sh RNA序列。实验分组为RACK1-sh RNA(实验组)、Vector-sh RNA(空载质粒组)和Control(空白对照组)三组。采用脂质体(Lipofectamine 2000)转染的实验方法,将靶向沉默RACK1基因的sh RNA序列转染至A549细胞,然后进行以下实验:(1)在荧光倒置显微镜下观察A549细胞的转染情况。(2)Western blot法检测转染后A549细胞中RACK1蛋白的表达。(3)MTT法检测转染后A549细胞对顺铂、吉西他滨、培美曲塞和紫杉醇四种不同类型化疗药物敏感性的影响。(4)Western blot法检测转染后A549细胞中肺耐药蛋白(LRP)和多药耐药蛋白(MRP)的表达。结果:1将转染24h后的A549细胞在荧光倒置显微镜下观察,在A549细胞中出现绿色荧光,说明转染成功;2转染36h后,Western blot法检测RACK1-sh RNA组RACK1蛋白的相对表达量为:0.267±0.47,明显低于Vector-sh RNA组(相对表达量为0.821±0.109)及Control组(相对表达量为0.842±0.060),与Vector-sh RNA组及Control组相比,差异有统计学意义(F=54.438,p0.05),Vector-sh RNA组与Control组相比较,差异无统计学意义(p0.05);3 MTT法检测示RACK1-sh RNA组细胞生长明显受到抑制,该组A549细胞对顺铂及紫杉醇的敏感性明显增加。顺铂、紫杉醇在36h、72h检测时对RACK1-sh RNA组A549细胞的抑制率显著增高,与Vector-sh RNA和Control组相比,差异有统计学意义(F顺铂36h=6.628,F紫杉醇36h=7.291,均p0.05;F顺铂72h=7.560,F紫杉醇72h=25.132,均p0.05);4 Western blot结果显示,RACK1-sh RNA组别A549细胞中相关耐药蛋白LRP和MRP的相对表达量为分别:0.163±0.056、0.246±0.050,与Vector-sh RNA组(0.420±0.080、0.644±0.057)及对照组(0.444±0.041、0.617±0.031)相比表达量均下降,差异有统计学意义(FLRP=19.430、FMRP=61.548,均p0.05)。结论:靶向沉默RACK1基因可提高A549细胞对铂类和紫杉醇类化疗药物的敏感性,其作用可能是通过下调LRP及MRP的表达而实现的。
【关键词】：肺腺癌A549细胞 RACK1基因 RNA干扰 LRP MRP
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R734.2
【目录】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 常用缩写词中英文对照表9-10
• 前言10-12
• 1 材料与方法12-22
• 1.1 实验材料与仪器12-14
• 1.2 实验方法14-22
• 2 结果22-28
• 2.1 A549 细胞的转染情况观察22
• 2.2 RACK-1 蛋白的表达检测22-23
• 2.3 靶向沉默A549 细胞中RACK-1 基因后对化疗药物敏感性的影响23-27
• 2.4 靶向沉默A549 细胞中RACK1 基因后对LRP和MRP表达的影响27-28
• 3 讨论28-32
• 4 结论32-33
• 参考文献33-39
• 综述39-53
• 参考文献48-53
• 致谢53-54
• 在学期间承担/参与的科研课题与研究成果54-55
• 个人简历55

【参考文献】

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1 朱薇;贺修胜;肖志强;易红;姜浩;;RACK1在大肠癌癌变过程中的表达和意义[J];国际病理科学与临床杂志;2013年01期

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本文编号：1068665