miR-192靶向调控MMP-11对人骨肉瘤MG63细胞侵袭及迁移的影响

发布时间：2017-10-21 22:16

  本文关键词：miR-192靶向调控MMP-11对人骨肉瘤MG63细胞侵袭及迁移的影响

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【摘要】：背景和目的骨肉瘤是一种起源于原始成骨间充质细胞的恶性肿瘤,是儿童和青少年最主要的原发性骨肿瘤。手术和多种药物化疗是本病的标准治疗方案,骨肉瘤治疗的新进展已经使患者的预后得到了显著改善,但仍有大约40%的患者发生肿瘤转移,提示了肿瘤细胞的化疗耐药性。因此,迫切需要发现新的生物标志物来预测这些患者的预后,并提供治疗方法。微小核糖核酸(miRNA)是小的非编码单链RNA,长度为19到25个核苷酸,存在于植物和动物的基因组中。miRNA的正常功能包括调控细胞分化途径、细胞周期和细胞凋亡。miRNAs的表达失调可能导致了肿瘤的发展。最近,在肺癌、膀胱癌、直肠癌、乳腺癌等癌细胞中,均发现miR-192表达下调,且常抑制肿瘤细胞的侵袭和迁移。但是至今未见miR-192在骨肉瘤中的表达和对骨肉瘤的影响。基质金属蛋白酶(MMPs)是一类锌离子依赖性金属蛋白酶。MMP-11在胚胎着床,器官发育,组织退化、修复等过程中起作用,同时还影响许多疾病,如动脉粥样硬化、类风湿性关节炎和癌症。原发肿瘤中高水平的MMP-11与患者的不良预后密切相关。本实验旨在研究miR-192靶向调节MMP-11蛋白对骨肉瘤侵袭和迁移的影响,了解miR-192、MMP-11与骨肉瘤之间的关系,从而为骨肉瘤的诊断和基因靶向治疗提供依据。方法1.从临床上收集了20例骨肉瘤患者的骨肉瘤组织及匹配的癌旁组织。对组织中miR-192及MMP-11基因的m RNA表达采用q RT-PCR方法进行检测。此外,采用Western blot实验对组织中MMP-11蛋白的表达水平进行检测。2.用脂质体将合成的miR-192 mimics和negative control转入骨肉瘤MG63细胞中。根据转染物质的不同,将细胞分成三组。miR-192组:转染miR-192mimics和脂质体;NC组:转染miR-192 negative control和脂质体;Blank组:仅转染脂质体。转染后的细胞置于二氧化碳培养箱培养,用于后续实验。3.对三组细胞进行划痕,观察miR-192对MG63细胞迁移的影响。4.对三组细胞进行Transwell实验,观察miR-192对MG63细胞侵袭的影响。5.对miR-192的作用靶标进行生物信息学预测,将miR-192 mimics或者negative control分别与构建的MMP-11的3’UTR区的野生型及突变型重组报告基因载体,共转染入骨肉瘤MG63细胞中,通过Western blot和双荧光素酶报告实验证实miR-192的作用靶标。结果1.骨肉瘤组织中miR-192的表达水平明显低于癌旁组织(P0.05),骨肉瘤组织中MMP-11基因的m RNA和蛋白表达水平明显高于癌旁组织(P0.05)。2.三组细胞转染后,miR-192组的miR-192表达水平明显高于NC组和Blank组(P0.05),表明转染成功。3.划痕实验结果表明:与NC组和Blank组相比,miR-192组骨肉瘤MG63细胞的迁移能力明显下降。4.Transwell实验结果表明:与NC组和Blank组相比,miR-192组穿过基底膜的骨肉瘤MG63细胞数明显减少(P0.05)。5.生物信息学分析软件软件预测miR-192的作用靶标是MMP-11。双荧光素酶报告实验和Western blot结果证明MMP-11是miR-192的作用靶标,miR-192靶向作用于MMP-11的3’UTR,负调控其表达。结论1.miR-192的高表达可有效抑制骨肉瘤细胞的迁移和侵袭。2.miR-192靶向作用于MMP-11的3’UTR区并负向调控其表达。
【关键词】：miR-192 MMP-11 骨肉瘤 迁移 侵袭
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R738.1
【目录】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-11
• 英文缩略词表11-12
• 1 前言12-14
• 2 实验材料14-17
• 3 实验方法17-26
• 4 实验结果26-34
• 5 讨论34-36
• 6 结论36-37
• 参考文献37-40
• 综述 MICRORNAS在骨与软组织肉瘤治疗中的潜在靶向作用40-67
• 参考文献56-67
• 个人简历67-68
• 致谢68

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本文编号：1075475