α2，8唾液酸转移酶在人慢性粒细胞白血病多药耐药性中的作用

发布时间：2017-10-21 20:38

  本文关键词：α2，8唾液酸转移酶在人慢性粒细胞白血病多药耐药性中的作用

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【摘要】：目的：人慢性粒细胞白血病白血病(chronic myeloid leukemia, CML)是一种骨髓异常增生的恶性肿瘤,约占成人白血病的20%,但其发病机制仍未明确。由于与患者配型相合的造血干细胞短缺,故在临床上化疗成为了CML治疗的首选方法。然而临床数据显示,大多的CML患者对化疗药物都有一定的耐药性,阻碍了对CML的治疗。随着科学家们对糖蛋白、糖组学的深入研究,越来越多的学者将更多的目光投入到肿瘤与糖基化的研究。近年来的研究表明,唾液酸糖基化修饰与肿瘤及其耐药有着密切的联系,但引起肿瘤发生发展及耐药的机制也尚未明确。a2,8唾液酸转移酶(a2,8-sialyltransferase)作为唾液酸转移酶家族中的一员,与白血病的发生及耐药有着密切的联系,但引起CML耐药的机制还尚未报道。本文通过研究6种a2,8唾液酸转移酶在三对人慢性粒细胞白血病细胞株及CML患者外周血单个核细胞中的差异表达,找出α2,8唾液酸转移酶与人CML多药耐药的潜在联系,从而为诊断、治疗人慢性粒细胞白血病多药耐药提供新的策略和靶点。方法：(1)通过实时荧光定量PCR技术(real-time PCR, RT-PCR)定量检测三对人CML细胞株及CML患者外周血单个核细胞中α2,8唾液酸转移酶基因的表达情况。(2)在三对人CML细胞株中,采用干扰和过表达技术特异性下调或上调差异表达3倍以上的α2,8唾液酸转移酶基因,用RT-PCR、免疫蛋白印迹法分别检测干扰或过表达前后K562/ADR、K562细胞内基因和蛋白水平的变化,以及PI3K/Akt信号通路主要分子的表达情况,MTT法进行体外药敏分析,体内抗瘤实验以及免疫组化分析检测白血病裸鼠模型对抗肿瘤药物敏感性分析,用流式分析检测P-糖蛋白(P-glycoprotein, P-gp)的表达情况。(3)用LY294002抑制P13K/Akt信号通路中P13K分子的表达,Akt shRNA干扰Akt的表达量,分别用上述方法分别检测抑制前后K562/ADR细胞在体内、外对化疗药物敏感性的变化以及P-gp的表达情况。结果：(1)在三对人CML细胞株中,只有ST8SIA4和ST8SIA6的表达差异在3倍以上,具有显著差异(P0.05),其余4种a2,8唾液酸转移酶基因无显著差异或不表达。而在CML患者外周血单个核细胞中,也有相同的结果。(2)特异性下调K562/ADR细胞中ST8SIA4、上调K562/ADR细胞中ST8SIA6时,该细胞的药物敏感性增强(P0.05)；特异性上调K562细胞中ST8SIA4、下调K562细胞中ST8SIA6时,该细胞的药物敏感性减弱(P0.05)。(3)特异性下调K562/ADR细胞中ST8SIA4, PI3K/Akt信号通路分子、P-gp表达降低(P0.05)；特异性上调K562细胞中ST8SIA4, PI3K/Akt主要信号通路分子、P-gp表达增加(P0.05)。(4) K562/ADR细胞经LY294002或Akt shRNA分别作用后,PI3K/Akt信号通路主要分子表达水平降低,P-gp表达量也降低(P0.05),并且增强了该细胞对抗肿瘤药物的敏感性。结论：(1)在三对人慢性白血病细胞株及CML耐药、非耐药患者外周血单个核细胞中a2,8唾液酸转移酶基因表达具有显著差异,而这些差异表达与CML多药耐药具有相关性。(2)a2,8唾液酸转移酶引起CML多药耐药的机制很可能是通过ST8SIA4调控PI3K/Akt信号通路继而引起P-gp的变化,从而使CML产生耐药性。
【关键词】：α2 8唾液酸转移酶 慢性粒细胞白血病 多药耐药 PI3K/Akt信号通路
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R733.72;R730.43
【目录】：

• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-13
• 材料和方法13-20
• 1. 实验材料13-15
• 1.1 实验对象13
• 1.2 主要试剂13-15
• 1.3 主要仪器15
• 2. 实验方法15-20
• 2.1 患者标本15
• 2.2 细胞培养15-16
• 2.3 RNA提取和Real-time PCR16-17
• 2.4 免疫印迹分析17
• 2.5 RNA干扰分析17
• 2.6 过表达分析17
• 2.7 体外药敏分析17-18
• 2.8 体内肿瘤对抗肿瘤药物的敏感分析18
• 2.9 免疫组化分析18-19
• 2.10 抑制PI3K/Akt信号通路19
• 2.11 流式分析19
• 2.12 统计分析19-20
• 结果20-33
• 1. ST8SIA基因在三对人CML及耐药细胞株和CML患者中的差异表达20-21
• 2. 特异性下调或上调ST8SIA4的表达对CML细胞体内外药敏性的影响21-25
• 3. 特异性下调或上调ST8SIA6的表达对CML细胞体内外药敏性的影响25-28
• 4. ST8SIA4对PI3K/Akt信号通路的激活以及对P-gp表达的影响28-30
• 5. 抑制PI3K/Akt信号通路对K562/ADR细胞体内外药敏性的影响30-33
• 讨论33-36
• 结论36-37
• 参考文献37-41
• 综述41-51
• 参考文献46-51
• 攻读学位期间发表文章情况51-52
• 致谢52

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本文编号：1075171