光动力疗法对结肠癌Caco-2细胞的杀伤作用及其机制研究

发布时间：2017-10-22 10:32

  本文关键词：光动力疗法对结肠癌Caco-2细胞的杀伤作用及其机制研究

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【摘要】：目的:光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)是19世纪末兴起的并在近年发展起来的一种治疗恶性肿瘤的新的辅助方法。氨三乙酸修饰卟啉(5-(4-N,N-diacetoxylphenyl)-10,15,20-tetraphenylporphyrin,DTPP)是一种新型亲脂性光敏剂DTPP,肿瘤细胞比正常静止细胞表达更多的低密度脂蛋白受体(low density lipoprotein receptor,LDLP),所以亲脂性的光敏剂DTPP能够在肿瘤细胞上高度聚集,其治疗肿瘤的机理目前报道较少。关于DTPP的研究集中在细胞毒性和细胞代谢方面,本研究以DTPP为光敏剂,以结肠癌Caco-2细胞为模型,研究DTPP-PDT中光敏剂浓度和激光照射能量密度关系,对细胞凋亡进行观察,并通过相关凋亡蛋白表达的跟踪,旨在为光动力治疗结肠癌的临床应用提供理论依据。方法:通过MTT法分析不同浓度的光敏剂及光照剂量对人源结肠癌Caco-2细胞作用24h后的细胞存活率;利用DAPI染色观察细胞是否出现凋亡;单细胞凝胶电泳实验探讨不同剂量DTPP-PDT时结肠癌Caco-2细胞DNA断裂情况;DNA Ladder分析再次检测DTPP-PDT引起Caco-2细胞的凋亡现象;Western Blotting对经DTPP-PDT处理过的Caco-2细胞表达的增殖蛋白,即增殖细胞核抗原(PCNA)进行了评估。结果:经过光动力对Caco-2细胞24小时的作用后,Caco-2细胞的生存率出现了不同程度的下降;DTPP-PDT后24小时,Caco-2细胞核凋亡特征越来越明显,而空白对照组、单纯光照组和单纯光敏剂组与正常培养的Caco-2细胞的形态学差异不明显,细胞的生长状态良好。当光敏剂DTPP浓度为10μg/m L,光照时间1分钟和2分钟,光照能量分别为1.2J/cm2和2.4J/cm2时,在荧光显微镜下观察彗星图像时,可见浓集闪亮的头部和分散暗淡的尾部,且随着光动力作用增强,当细胞损伤效应超过其自身DNA修复时,彗星细胞数目逐渐增多,慧尾逐渐拉长。而空白对照组、单纯光照组和单纯光敏剂组Caco-2细胞则无明显改变。用不同剂量的DTPP-PDT处理Caco-2细胞24小时后出现了DNA梯状条带。Westernblot分析表明,在DTPP 10ug/ml处理Caco-2细胞,光照不同时间后,其PCNA出现了下调。结论:当我们选择合适的光敏剂质量浓度和光照能量时,DTPP-PDT可以有效的杀伤结肠癌Caco-2细胞。这种杀伤作用除了引起细胞凋亡外,还有介导抑制Caco-2细胞的增殖能力。
【关键词】：光动力治疗 结肠癌 凋亡 增殖 光敏剂
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.35
【目录】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-8
• 引言8-11
• 第一部分 光动力疗法对结肠癌Caco-2 细胞的细胞存活率的影响11-21
• 材料与方法11-15
• 结果15-17
• 附图17-18
• 讨论18
• 小结18-19
• 参考文献19-21
• 第二部分 光动力疗法对结肠癌Caco-2 细胞增殖和凋亡的影响21-39
• 材料与方法21-30
• 结果30-32
• 附图32-34
• 讨论34-36
• 小结36-37
• 参考文献37-39
• 结论39-40
• 综述 结肠癌和腺瘤性息肉的病生理、临床表现与诊断40-68
• 致谢68-69
• 个人简历69-70

【参考文献】

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1 程智广,余翼飞,顾瑛,刘凡光;血卟啉单甲醚-光动力学疗法对兔移植静脉再狭窄的抑制作用[J];中国激光医学杂志;2004年01期

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本文编号：1078017