miR-143降低DNMT3B表达提高肝细胞癌对阿霉素的敏感性

发布时间：2017-10-23 06:20

  本文关键词：miR-143降低DNMT3B表达提高肝细胞癌对阿霉素的敏感性

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【摘要】：背景与目的:化疗是治疗肝癌主要手段,肝细胞癌对化疗药物产生耐药导致化疗的失败。肿瘤耐药机制仍然未明确,近年来mi RNA为耐药机制的研究开辟了新的思路。本研究旨在构建肝细胞癌耐阿霉素的耐药细胞株模型,分析耐阿霉素细胞株和亲本细胞株之间mi R-143、DNMT3B和MDR1等表达差异,进一步探讨mi R-143在调控肝细胞癌耐阿霉素的作用机制,本研究希望有助于临床逆转肝癌耐阿霉素提高患者生存率。方法:低剂量持续加量诱导法构建耐药细胞株SMMC-7721/ADM;MTT检测亲本细胞与耐药细胞的IC50值及耐药系数(RI);细胞计数法计算倍增时间;倒置显微镜观察形态学差异;荧光定量PCR检测DNMT3B、MDR1、Bcl-2、Bax m RNA及mi R-143的表达量;Western blot法检测DNMT3B蛋白表达量。耐药细胞株SMMC-7721/ADM中脂质体法转染mi R-143 mimics;MTT法检测转染前后耐药细胞IC50值及耐药系数(RI);Transwell检测细胞的迁移变化;流式细胞术检测细胞的凋亡率;荧光定量PCR检测DNMT3B和MDR1 m RNA表达量;Western blot检测DNMT3B蛋白表达量。结果:成功构建耐3.0μg/m L阿霉素的肝细胞癌耐药株SMMC-7721/ADM;与亲本细胞相比较,耐药细胞株IC50值升高(p0.05);生长增殖缓慢(p0.05);mi R-143表达量降低(p0.05),DNMT3B、MDR1、Bax、Bcl-2的m RNA表达量升高(p0.05);耐药细胞中DNMT3B蛋白表达量升高(p0.05)。耐药细胞转染mi R-143 mimics后,IC50值降低(p0.05);侵袭能力下降(p0.05);凋亡增加(p0.05);DMT3B和MDR1m RNA表达量下降(p0.05);DNMT3B的蛋白表达量下降(p0.05)。结论:通过低剂量持续加量诱导法成功构建的耐药细胞株SMMC-7721/ADM符合耐药细胞模型;耐药细胞株中mi R-143可能通过降低DNMT3B的表达量,提升耐药细胞对阿霉素的敏感性。
【关键词】：肝细胞癌 阿霉素 miR-143 DNMT3B 肿瘤细胞耐药
【学位授予单位】：蚌埠医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 摘要5-6
• ABSTRACT6-8
• 前言8-11
• 实验材料11-13
• 实验方法13-25
• 结果25-34
• 讨论34-37
• 结论37-38
• 参考文献38-42
• 致谢42-43
• 附录A 英文缩略词43-44
• 附录B 主要试剂配制44-45
• 附录C 个人简历及发表文章45-46
• 附录D 综述46-55
• 参考文献52-55

【参考文献】

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本文编号：1081946