青蒿琥酯对宫颈癌U14细胞移植瘤VEGF及COX-2表达的影响

发布时间：2017-10-23 06:32

  本文关键词：青蒿琥酯对宫颈癌U14细胞移植瘤VEGF及COX-2表达的影响

  更多相关文章： 青蒿琥酯 宫颈癌 U14 移植瘤 COX-2 VEGF MVD

【摘要】：目的:子宫颈癌为最常见的妇科恶性肿瘤之一,近年在发展中国家发病年龄有年轻化趋势。通过手术及放化疗的方法虽可改善早期宫颈癌预后,但对导致宫颈癌患者死亡的复发性、转移性宫颈癌,其疗效尚不理想。手术相对创伤较大而化疗药物长期大量应用可能导致毒性积累,副反应加重甚至化疗药物耐药,因此寻找高效、无毒的抗肿瘤药物成为研究热点。血管生成是促血管形成因子和抑制因子协调作用的复杂过程,在创伤修复、生长发育及生殖中占据重要位置。血管内皮细胞生长因子(VEGF)及环氧合酶2(COX-2)是与肿瘤血管生成密切相关的细胞因子,参与多种肿瘤的发生、发展。青蒿琥酯(ART)已证实对于肺癌、中枢神经系统肿瘤、结肠癌、白血病、黑色素瘤、肾脏肿瘤等肿瘤细胞具有良好疗效[1],且副作用小于传统化疗药物。目前体外研究证实,青蒿琥酯可通过抑制肿瘤组织血管生成,从而抑制肿瘤生长。本实验通过研究青蒿琥酯作用下宫颈癌U14移植瘤VEGF及COX-2的表达变化及其与微血管密度(MVD)的相关性,探究青蒿琥酯是否可通过抑制血管生成而发挥抗肿瘤效应。方法:1移植瘤动物模型的建立及实验分组收集对数生长期U14细胞,调整浓度为1×10~7/ml,接种于小鼠腹腔(0.7ml/只),待3-5天后腹水形成,取腹水离心后,生理盐水稀释为5×10~7/ml,于雌性KM小鼠(5-6周龄,15-17g)左后肢近背部皮下接种0.2ml。成瘤且肿瘤直径5mm进行后续实验。将实验动物随机分为4组:1、正常对照组(未接种肿瘤,肌注生理盐水1/日)2、肿瘤对照组(成瘤后,肌注生理盐水1/日);3、ART组(成瘤后,肌注青蒿琥酯20mg/kg/d);4、DDP组(成瘤后,腹腔注射顺铂2mg/kg/d),各给药0.2ml。每组80只,各组共给药7日。后各组再次随机分为4组,分别于第10d、20d、30d、40d处死,每组20只。2肿瘤组织中VEGF及COX-2表达情况及MVD计数的分析制备肿瘤组织石蜡切片,免疫组化染色后进行图像分析,VEGF、COX-2表达强度以灰度值(GS)表示,数值大小与阳性细胞表达强度呈反比。以矩形走形计算200个细胞,计算各组阳性细胞表达百分率。光镜下VEGF染色阳性细胞呈棕黄色,采用weidner等方法进行MVD量化分析。首先在低倍视野下扫视整个组织切片,在肿瘤浸润区域选取内皮细胞染色分析、微血管数量密集的视野,随机选取6个高倍视野,对微血管数计算,计算平均值作为MVD。任何棕黄色阳性内皮细胞或内皮细胞簇,只要与临近肿瘤细胞、血管及其他结缔组织分界清楚,即可作为1个微血管数;肿瘤硬化取和大于8个红细胞的血管不做计数对象。3统计学处理:对各组数据通过SPSS13.0版本软件进行正态性、方差齐性检验,对VEGF、COX-2表达情况及MVD计数进行单因素方差分析(analysis of variance,ANOVA),对于不符合正态性或方差齐性检验者,采取K-independent samples秩和检验,SNK法进一步对多样本均数进行两两比较。结果:1小鼠移植瘤中微血管生成情况与肿瘤对照组移植瘤中MVD计数相比,DDP组及ART组均明显减低(均P0.05)。肿瘤组织中MVD计数呈肿瘤对照组ART组DDP组的总体趋势。DDP组及ART组间无明显统计学差异(P0.05),除在第20d时ART组肿瘤组织中MVD计数较DDP组明显增高(21.23±2.71v.s16.69±2.44,P0.05)。在肿瘤对照组、DDP组及ART组中,各组MVD计数呈10d20d30d40d的总体趋势,除肿瘤对照组在10d及20d中无显差异(20.59±2.52v.s22.72±2.97,P0.05),ART组在20d及30d时无明显差异(21.23±2.71v.s20.30±5.06,P0.05),其余各组间均差异显著(均P0.05)。2 ART对小鼠移植瘤中VEGF和COX-2表达的影响2.1对小鼠移植瘤中VEGF表达情况的影响与肿瘤对照组第10天VEGF阳性细胞百分率为(20.58%±3.28%)相比,DDP组明显降低(14.89%±2.70%,P0.05),ART组无明显变化(17.95%±2.02%,P0.05)。第20d、30d及40d时,移植瘤中VEGF阳性细胞百分率呈肿瘤对照组ART组DDP组的总体趋势,除30d时,ART组与DDP组之间无明显差异外(38.54%±7.10%v.s31.67%±3.84%,P0.05),其中各组之间均差异显著(均P0.05)。ART组、DDP组及肿瘤对照组中VEGF阳性细胞百分率均呈10d20d30d40d的总体趋势,除DDP组在第10d和20d时无明显差异外(14.89%±2.70%v.s17.41%±4.89%,P0.05),其中各组之间均差异显著(均P0.05)。在第10d及40d时,移植瘤中VEGF表达GS值在各组中无明显统计学差异(P0.05)。第20d和30d时,与肿瘤对照组GS值(124.55±1.44,121.67±5.39)相比,ART组明显降低(118.14±5.33,111.24±6.42,P0.05),DDP组在第20d时明显回升(132.98±3.49,P0.05),第30d时GS值略有降低(120.40±3.89,P0.05)。2.2对小鼠移植瘤中COX-2表达情况与肿瘤对照组第10天时COX-2阳性细胞百分率(34.10%±6.79%)相比,DDP组明显减低(16.92%±6.11%,P0.05),ART组无明显变化(30.06%±5.28%,P0.05)。在第20d、30d及40d时,移植瘤中COX-2阳性细胞百分率呈肿瘤对照组ART组DDP组的总体趋势,除30d时,ART组与DDP组之间无明显差异外(53.83%±5.54%v.s45.76%±11.83%,P0.05),其余各组之间均差异显著(均P0.05)。ART组、DDP组及肿瘤对照组中COX-2阳性细胞百分率均呈10d20d30d40d的总体趋势。除ART组在第10d、20d时(30.06%±5.28%v.s31.88%±6.72%,P0.05),及DDP组在第10d、20d时(16.92%±6.11%v.s19.32%±6.03%,P0.05)无明显差异外,各组间均差异显著(均P0.05)。与肿瘤对照组第10d时COX-2表达GS值(109.36±5.37)相比,DDP组明显回升(118.67±3.82,P0.05),ART组无明显变化(109.52±6.40,P0.05)。在第20d、30d及40d时,移植瘤中COX-2阳性细胞表达强度在ART组、DDP组及肿瘤对照组中无明显统计学差异(均P0.05)。3小鼠移植瘤中VEGF、COX-2表达及MVD相关性分析小鼠肿瘤组织中VEGF及COX-2阳性细胞百分率在不同时间均呈正相关(10d:r=0.526,P0.05;20d:r=0.599,P0.05;30d:r=0.859,P0.05;40d:r=0.951,P0.05)。VEGF阳性细胞百分率与MVD计数之间在不同时间均呈正相关(10d:r=0.773,P0.05;20d:r=0.558,P0.05;30d:r=0.804,P0.05;40d:r=0.565,P0.05)。COX-2阳性细胞百分率与MVD计数之间在除10d时均呈正相关(10d:r=0.339,P0.05;20d:r=0.615,P0.05;30d:r=0.595,P0.05;40d:r=0.563,P0.05)。结论:1青蒿琥酯抑制小鼠U14移植瘤生长可能与抑制肿瘤组织中VEGF及COX-2的表达有关。2青蒿琥酯可显著阻抑小鼠U14移植瘤中微血管生成,抑制肿瘤组织生长。3 VEGF与COX-2在肿瘤组织中表达具有正相关关系。COX-2及VEGF与肿瘤组织中微血管生成具有相关性。
【关键词】：青蒿琥酯 宫颈癌 U14 移植瘤 COX-2 VEGF MVD
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.33
【目录】：

• 中文摘要4-8
• 英文摘要8-13
• 英文缩写13-14
• 前言14-15
• 材料与方法15-19
• 结果19-21
• 附图21-26
• 附表26-29
• 讨论29-32
• 结论32-33
• 参考文献33-36
• 综述 青蒿素及其衍生物阻抑肿瘤生长和转移的研究进展36-47
• 参考文献41-47
• 致谢47-48
• 个人简历48

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前8条

1 黄明;金小康;蔡庆超;李敏;林志彬;李卫东;;双氢青蒿素治疗狼疮肾炎与SIGIRR诱导免疫负调控的相关性[J];中国免疫学杂志;2015年12期

2 吕江涛;杨华;郎景和;谭先杰;;青蒿素衍生物对宫颈癌细胞血管形成相关分子表达和人脐静脉内皮细胞血管形成能力的影响[J];现代妇产科进展;2013年11期

3 伍靓;吴奇;李晶;罗誉川;黄灵坚;曹聪明;;COX-2、VEGF及MVD在宫颈癌中的表达及意义[J];海南医学院学报;2014年02期

4 万珊;孟刚;顾康生;;外周T细胞淋巴瘤中VEGF表达和MVD水平及其临床意义[J];临床肿瘤学杂志;2012年08期

5 李京佳;林相国;许涛;徐万海;王晓民;;VEGF家族及其在肿瘤生长中作用的研究[J];现代生物医学进展;2012年04期

6 陈欢欢,周慧君;青蒿琥酯的抗血管生成作用[J];药学学报;2004年01期

7 郑红艳;青蒿素母液体外抗真菌试验[J];四川畜牧兽医;2001年05期

8 邓定安;蔡俊超;;具有抗肿瘤活性的青蒿酸衍生物[J];有机化学;1991年05期

，

本文编号：1082004