苯并（a）芘对幽门螺杆菌CagA的影响及对胃上皮细胞增殖的影响

发布时间：2017-10-23 17:30

  本文关键词：苯并（a）芘对幽门螺杆菌CagA的影响及对胃上皮细胞增殖的影响

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【摘要】：目的胃癌是目前全世界最常见的恶性肿瘤之一。幽门螺杆菌是胃癌发生最主要的危险因素,幽门螺杆菌阳性者胃癌发生的危险是幽门螺杆菌阴性者的3-6倍。苯并(a)芘(BaP)是一种常见环境致癌物,已有研究表明长期吃烧烤、油炸类食物以及吸烟均是胃癌的危险因素。研究表明烧烤、油炸食品与幽门螺杆菌感染关系密切,长期食用烧烤食品者幽门螺杆菌感染率更高。本实验的目的是研究BaP对幽门螺杆菌增殖能力及其毒力因子表达的影响,并将BaP和幽门螺杆菌共同作用于胃粘膜上皮细胞GES-1,检测对GES-1细胞增殖活性的影响。为幽门螺杆菌与环境因素在导致胃癌过程中是否有协同作用提供实验依据。方法在幽门螺杆菌培养过程中加入不同浓度BaP (0.2,0.5,1.0,2.0 μmol/L),并设置空白对照组(BaP 0.0 μmol/L)及二甲基亚砜(DMSO)溶质对照组。设置三个时间点(24,48,72 h)。分别检测各浓度组及时间点幽门螺杆菌增殖能力变化；RT-PCR检测幽门螺杆菌CagA mRNA表达水平。将幽门螺杆菌稀释菌液100μL按不同细菌/细胞比(MOI 20：1,50：1,100：1,200：1,400：1)以及将不同浓度BaP溶液10 μL(0.2,0.5,1.0,2.0μmol/L)分别作用于GES-1细胞24 h；将各浓度BaP及幽门螺杆菌稀释菌液(MOI 20：1)共同作用于GES-1细胞24 h。最后用CCK-8法检测细胞增殖活力。结果BaP能促进幽门螺杆菌增殖。BaP1.0 μmol/L、2.0μmol/L在24h对幽门螺杆菌增殖的影响有统计学差异。各浓度组BaP在48、72 h对幽门螺杆菌增殖的影响均有统计学差异。BaP能促进幽门螺杆菌CagA mRNA表达。在24、48 h,随着浓度的增加,CagA表达相应增加；在72 h,随着BaP浓度增加CagA的表达逐渐减低,与对照组相比具有统计学差异。幽门螺杆菌对GES-1细胞增殖活性的影响随着MOI的不同明显不同,在MOI 20：1,50：1,100：1时,幽门螺杆菌促进GES-1细胞增殖,与对照组相比有统计学差异。当MOI继续增大时(200：1,400：1)GES-1细胞增殖率逐渐下降,在MOI 400：1时出现抑制增殖。BaP呈浓度依赖性促进GES-1细胞增殖。当幽门螺杆菌(MOI 20：1)和BaP共同作用于GES-1细胞,随着BaP浓度的升高,GES-1细胞增殖率并没有逐渐升高,但各浓度组同单纯幽门螺杆菌组相比仍具有统计学差异。另外,在BaP浓度为0.2,0.5μmol/L,GES-1细胞增殖率同未加幽门螺杆菌菌液的BaP组相比,有统计学差异。结论BaP能以时间、浓度依赖方式促进幽门螺杆菌增殖和CagA mRNA表达。幽门螺杆菌和BaP共同作用于GES-1细胞,对GES-1细胞增殖有协同促进作用。BaP可能增加幽门螺杆菌相关胃癌的风险。
【关键词】：幽门螺杆菌 苯并(a)芘 胃癌 增殖 CagA
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.2
【目录】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-9
• 第一章 前言9-13
• 第二章 实验材料与方法13-23
• 2.1 实验材料13-14
• 2.2 主要实验用液配制14-16
• 2.3 幽门螺杆菌培养与检测16-17
• 2.4 幽门螺杆菌与苯并(a)芘共培养17-18
• 2.5 幽门螺杆菌总RNA提取及浓度测定18
• 2.6 RT-PCR检测幽门螺杆菌CagA mRNA表达18-20
• 2.7 细胞增殖实验20-22
• 2.8 统计方法及制图22-23
• 第三章 实验结果23-29
• 3.1 幽门螺旋杆菌的培养和鉴定23-24
• 3.2 苯并(a)芘对幽门螺杆菌增殖的影响24-25
• 3.3 苯并(a)芘对幽门螺杆菌毒力因子CagA mRNA表达的影响25-27
• 3.4 BaP和幽门螺杆菌对GES-1细胞增殖活性的影响27-29
• 第四章 讨论29-32
• 第五章 结论32-33
• 参考文献33-40
• 文献综述40-50
• 参考文献45-50
• 缩略语表50-51
• 在学期间的研究成果51-52
• 致谢52

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本文编号：1084574