尼克酰胺甲基转移酶影响胃癌细胞的生物学功能和患者预后

发布时间：2017-10-23 20:13

  本文关键词：尼克酰胺甲基转移酶影响胃癌细胞的生物学功能和患者预后

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【摘要】：[研究背景]在临床实践中,一些指标被广泛用于预测胃癌患者的预后。 这些指标包括如癌胚抗原(CEA)、ca199等分子标志物的联合检测以及肿瘤分期与分级的划分。但是,这些预测患者预后的方法依然有一定的局限性,所以,胃癌仍然是最致命的人类恶性肿瘤之一。代谢酶尼克酰胺甲基转移酶(NNMT, EC.2.1.1.1)曾被报道参与各种癌的进展和发展。然而,NNMT在胃癌中的预后和生物功能尚不清楚。[材料方法]1.利用定量逆转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测胃癌患者新鲜组织(包括肿瘤组织和瘤旁组织)NNMT的mRNA表达是否存在差异。2.采用免疫组织化学(IHC)的方法,检测蜡块中良恶性胃粘膜上皮组织中的NNMT蛋白质表达的差异。3.统计并评估患者胃癌组织中NNMT蛋白表达与临床病理及预后的关系。4.利用siRNA介导,抑制NNMT在胃腺癌细胞株MGC803 BGC823中的表达, 探究NNMT在胃癌细胞系体内外的生物学功能。5.充分检索并分析数据库TCGA,并利用cBioPortal网站计算并得出NNMT共表达基因列表.采用DAVID Bioinformatics Resources 6.7对列表中的高表达相关性基因进行富集分析。[结果]1.通过qRT-PCR实验发现与邻近非癌组织相比,NNMT的mRNA和蛋白水平在胃癌组织中上调;通过免疫组化实验发现NNMT蛋白表达水平在胃癌组织中的表达明显升高(56.8%vs31.9%)。2. NNMT的蛋白表达水平与原发肿瘤大小、淋巴结转移、远处转移和TNM分期有相关性。3.单因素和多因素COX回归生存分析验证了NNMT的蛋白表达是胃癌患者总存活率的独立预后因素。4.用siRNA干扰胃癌细胞系MGC803、BGC823中NNMT的表达水平,细胞增殖、 侵袭和迁移在体内外都受到了抑制。[结论]总体而言,这项研究的结果表明NNMT的表达在胃癌组织中上调,并能促进胃癌细胞的增殖、迁移侵袭。最重要的是,NNMT的表达水平是一个潜在的预测胃癌患者预后的新靶点。
【关键词】：尼克酰胺甲基转移酶 预后 胃癌 组织芯片
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.2
【目录】：

• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 前言10-12
• 第一部分：尼克酰胺甲基转移酶在胃癌组织中的表达及预后影响12-31
• 材料12-15
• 1、TCGA数据库12-13
• 2、组织标本13
• 3、实验试剂13-14
• 4、实验仪器14
• 5、引物14-15
• 方法15-20
• 1、总RNA的提取(Trizol法)15
• 2、逆转录cDNA15-16
• 3、实时荧光定量PCR16
• 4、组织芯片的制备16-17
• 5、免疫组化分析17-18
• 6、统计学分析18-20
• 结果20-22
• 一、TCGA数据库分析20
• 二、NNMT在胃癌及癌旁组织中的表达情况20
• 三、NNMT的表达与胃癌临床病理特征的关系20-21
• 四、NNMT的表达与胃癌预后的关系21-22
• 附图表22-31
• 第二部分：尼克酰胺甲基转移酶影响胃癌细胞生物学功能31-50
• 材料31-36
• 一、实验材料31-34
• 1、细胞株与培养基31
• 2、实时荧光定量PCR试剂31-32
• 3、Western Blot相关试剂32
• 4、siRNA及细胞转染相关试剂32
• 5、与细胞功能学有关的实验试剂32-33
• 6、相关培养基及溶液的配置33-34
• 二、实验仪器及耗材34-36
• 方法36-44
• 1、细胞培养36
• 2、实时荧光定量PCR检测mRNA表达36-38
• 3、Western blot蛋白测定38-40
• 4、Transwell小室实验检测细胞侵袭和迁移40-41
• 5、碘化丙锭PI单染法检测细胞周期41
• 6、CCK8实验检测细胞增殖能力41
• 7、细胞转染41-42
• 8、生物信息学分析42
• 9、裸鼠成瘤实验42-43
• 10、统计学分析43-44
• 结果44-46
• 1. NNMT在胃癌细胞系中的表达情况44
• 2. 沉默NNMT胃癌细胞系的构建44
• 3. 沉默NNMT对胃癌细胞系MGC803和BGC823迁移和侵袭能力的影响44
• 4. 沉默NNMT对胃癌细胞系MGC803和BGC823细胞周期和增殖能力的影响44-45
• 5. 沉默NNMT对裸鼠成瘤能力的影响45
• 6. 沉默NNMT后可能影响的信号通路45-46
• 附图表46-50
• 讨论50-53
• 结论53-54
• 参考文献54-61
• 文献综述61-75
• 1. NNMT在多种肿瘤中的异常表达62-64
• 2. NNMT影响肿瘤细胞的生物学功能及其机制64-66
• 3. NNMT与肿瘤患者预后的关系66-68
• 参考文献68-75
• 附录75-77
• 附录1：攻读学位期间发表文章75-76
• 附录2：缩略词表76-77
• 致谢77-78

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 ;Nicotinamide N-methyltransferase protein expression in renal cell cancer[J];Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology);2010年02期

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本文编号：1085159