内源性朊蛋白在结肠炎相关性结肠癌中的作用的研究

发布时间：2017-10-23 21:04

  本文关键词：内源性朊蛋白在结肠炎相关性结肠癌中的作用的研究

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【摘要】：朊蛋白(Prion protein,PrP)是朊病毒的正常型异构体,PrP可通过构型的改变转化成朊病毒。前期对PrP的研究主要集中在其在朊病毒类疾病中的作用,然而PrP除在脑中表达外也广泛的在其它组织中有表达,这提示人们PrP应该具有其它重要的生理作用。我们前期的胃癌组织芯片的数据显示PrP在肿瘤中的表达量显著低于癌旁组织,因而PrP有可能对肿瘤的发生和发展起作用。本研究通过在PrP基因敲除小鼠(PrP-/-)和野生小鼠(WT)中构建偶氮甲烷(AO M)与葡聚糖硫酸钠盐(DSS)诱导结肠炎相关性结肠癌模型对PrP在结肠癌中的作用进行研究。在AOM/DSS联合诱导的结肠炎相关性结肠癌模型的三种给药方案中(AOM×6+2%DSS×1,AOM×1+O.5％DSS×3,AOM×1+1%DSSx3),均成功诱导出肿瘤,而且PrP-/-组小鼠在肿瘤个数上显著高于WT组小鼠(P=0.014,0.0071和0.0086)。在DSS单独诱导结肠炎相关性结肠癌模型的两种给药方案中(0.5%DSS×3.1%DSS×3),虽然低剂量(0.5%DSS)给药方案未诱导出肿瘤,但组织病理学指数显示PrP-/-小鼠较野生型小鼠(wide-type,WT)具有更严重的炎症反应(P0.001)。另一种给药方案成功诱导出肿瘤,而且PrP-/-组小鼠在肿瘤个数上显著高于WT组小鼠(JP＝0.0015)。Ki-67免疫组化结果显示两种基因型小鼠肿瘤间的Ki-67标记指数之间不存在显著差异,但正常未处理PrP-/-小鼠显著高于WT小鼠(P0.001)。上述结果显示PrP可能在保护结肠上皮细胞防止癌变和抑制细胞增殖上具有重要作用。
【关键词】：朊蛋白 葡聚糖硫酸钠盐 偶氮甲烷 结肠炎 结肠癌
【学位授予单位】：华东师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.35;R574.62
【目录】：

• 摘要6-7
• ABSTRACT7-10
• 前言10-13
• 一. 实验材料13-20
• 1.1 实验动物13
• 1.2 主要试剂13-15
• 1.3 主要工作液配方15-17
• 1.4 主要仪器17-18
• 1.5 实验器材18-20
• 二. 实验方法20-32
• 2.1 实验小鼠的饲养和繁殖20
• 2.2 小鼠组织DNA的抽提20-21
• 2.3 实验小鼠基因型的PCR鉴定21-22
• 2.4 小鼠组织蛋白抽提22-23
• 2.5 BCA法测定蛋白浓度23
• 2.6 Western Blot检测不同组织中的PrP表达23-24
• 2.7 小鼠结肠炎相关性结肠癌模型的构建24-26
• 2.8 小鼠的处死与解剖取结肠26
• 2.9 石蜡切片的制备26-27
• 2.10 HE染色27-28
• 2.11 组织病理学变化指数(Histopathological change index,HCl)评分与肿瘤病理诊断28-29
• 2.12 免疫组织化学(IHC)染色29-31
• 2.13 Ki-67标记指数(labeling index,LI)31
• 2.14 数据分析31-32
• 三 实验结果32-48
• 3.1 实验小鼠的繁殖与基因型鉴定32
• 3.2 Western Blot检测不同组织中PrP的表达32-33
• 3.3 小鼠结肠炎相关性结肠癌模型的构建结果33-41
• 3.4 组织病理学变化指数(Histopathological change index,HCl)评分结果41-42
• 3.7 小鼠结肠癌HE染色与病理诊断的结果42-45
• 3.8 Ki-67免疫组化染色结果45-48
• 四 讨论48-51
• 综述51-55
• 参考文献55-60
• 致谢60-61
• 附录61-62
• 附件62-65

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