血清exosome中miR-221与胃癌卵巢转移的相关性研究

发布时间：2017-10-24 15:33

  本文关键词：血清exosome中miR-221与胃癌卵巢转移的相关性研究

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【摘要】：目的:Exosome是由细胞内产生的,大小约为30-140nm的膜性小囊泡,其内含有各种类型的核酸,蛋白质,脂类物质。Exosome内含的miRNA-221与非编码RNA进行碱基配对可通过信号通路介导促进上皮间质化Epithelial-to-mesenchymal transition(EMT)使肿瘤更易发生转移。因此检测胃癌患者血清exosome内miRNA的含量是否能作为生物学指标来判断胃癌分期和是否转移,从而指导治疗。方法:共收集2014年6月至2016年3月入住湖南省肿瘤医院胃癌卵巢转移患者血清30份(实验组)。入组标准为:(1)已通过胃镜、病理活检、超声内镜、CT、B超确诊为胃癌卵巢转移患者;(2)未发现有其它的原发肿瘤;(3)患者未接受放化疗、中药治疗等辅助治疗;(4)非胃癌复发患者。30份未发生胃癌卵巢转移的女性患者血清(对照组)。入组标准为:(1)已通过胃镜活检、超声内镜、CT、B超确诊为胃癌;(2)未发现有胃癌的远处转移;(3)未发现有其它的原发肿瘤;(4)患者未接受放化疗、中药治疗等辅助治疗;(5)非胃癌复发患者。对抽取的血清样本于3000g离心15分钟去除细胞或细胞碎片;将上清转移至另一干净的灭菌管中,加入适量的ExoQuick TC试剂;上下颠倒离心管,混匀;4℃孵育过夜(至少12小时);室温或4℃1500g离心30min,管底可见沉淀;去除上清;1500g继续离心5min,小心去除上层的液体组分;用100-500ul buffer重悬沉淀。通过western blot检测CD9、CD63来证实exosome提取成功。TRIzol法来对exsome中5种miRNA(miR-221、miR-376c、miR-744、miR-451、miR-486)进行提取。然后通过PCR实验来对比试验组和对照组miRNA含量。结果:为了探究胃癌卵巢转移与非转移病人血清中exosome的miRNA的表达是否与胃癌卵巢转移呈相关性,我们选取了5种在癌症病人血清exosome中高表达的miRNA进行检测,发现在胃癌卵巢转移病人相比于未发生胃癌卵巢转移病人血清exosome中miR-221的含量有显著性差异(P0.01),胃癌卵巢转移患者血清exosome中miR-221的含量呈明显的高表达,其它exosome中内含的miRNA如miR-376c、miR-774、miR-451和miR-486在胃癌卵巢转移患者和非转移病人血清中含量没有显著性差异。为了更细致分析地血清exosome中miR-221在不同年龄段胃癌卵巢转移病人的差异性,将胃癌卵巢转移患者按年龄分为20-40岁、40-60岁、60岁以上三组,其中20-40岁组患者相比于其他年龄段患者血清exosome中miR-221呈更高的表达水平。结论:1.胃癌卵巢转移患者血清exosome中miR-221呈明显高表达。2.血清exosome中miR-221有作为诊断胃癌卵巢转移的生物学指标的可能。3.胃癌卵巢转移患者血清exosome中miR-221含量还与年龄相关,20-40岁患者中该指标更高,预示着更明显的特征。
【关键词】：胃癌 exosome 微小RNA-221(miR-221) 胃癌卵巢转移的诊断 肿瘤微环境
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.2
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 主要缩略词中英文对照索引9-12
• 第1章 绪论12-16
• 1.1 胃癌概述12-13
• 1.2 肿瘤与exosome的关系13
• 1.3 肿瘤与miRNA的关系13-16
• 第2章 材料与方法16-24
• 2.1 实验标本16-17
• 2.2 抗体与试剂17
• 2.3 主要实验仪器17
• 2.4 实验方法17-21
• 2.4.1exosome的提取17-18
• 2.4.2 TRIzol法提RNA18-19
• 2.4.3 定量PCR实验19-20
• 2.4.4 western blot20-21
• 2.5 统计分析21-24
• 第3章 结果24-30
• 3.1 通过检测测CD9和CD63证实exosome提取成功24-25
• 3.2 血清exosome中miRNA和胃癌卵巢转移的关系25-28
• 3.3 各年龄段胃癌卵巢转移患者血清exosome中miR-221表达水平28-30
• 第4章 讨论30-34
• 4.1 Exosome在胃癌中作用30
• 4.2 MiR-221在胃癌中的作用30-32
• 4.3 血清Exosome中miRNA作为诊断胃癌卵巢转移的生物学指标的潜力32-33
• 4.4 展望33-34
• 第5章 结论34-36
• 参考文献36-40
• 综述 Exsome在癌症诊断与治疗中的研究进展40-52
• 参考文献48-52
• 作者攻读学位期间的科研成果52-54
• 致谢54

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