MTSS1基因与宫颈癌相关性的实验研究

发布时间：2017-10-25 11:40

  本文关键词：MTSS1基因与宫颈癌相关性的实验研究

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【摘要】：研究背景宫颈癌是妇科最常见的恶性肿瘤,发病率逐年增加,尽管早期发现并结合根治性手术可提高宫颈癌患者的预后,但仍有部分患者会出现局部复发或远处转移,因而了解宫颈癌发生发展的分子机制,参与指导临床诊断与治疗显得尤为迫切。有研究指出转移抑制基因1(Metastasis suppressor 1, MTSS1)与多种恶性肿瘤的发展及转移有关,因此研究MTSS1基因在宫颈癌中的表达变化及其作用机制,有望为宫颈癌临床诊断、治疗、预后评估以及新药研发应用提供理论依据。目的检测正常及宫颈癌组织中MTSS1基因的表达情况,分析该基因在各组织中表达变化与临床病理因素间的关系;探讨宫颈癌中MTSS1基因与Shh信号通路的关系；检测顺铂(cisplatin, DDP)对人宫颈癌Hela细胞中MTSS1基因与信号通路ERK和AKT表达的影响,探讨MTSS1在宫颈癌发生发展及转移过程中的作用及分子机制。方法1.应用实时荧光定量PCR (q-PCR)和蛋白质印迹法(Western Blot)检测不同宫颈组织中MTSS1基因及其蛋白的表达水平。2.应用q-PCR检测不同分期的宫颈癌组织中MTSS1基因及Shh信号通路相关基因(Ptch、Smo及Gli1)的表达;Western迹法及免疫组化检测MTSS1及Glil蛋白的表达情况。3.体外培养宫颈癌Hela细胞,分别用不同浓度的顺铂对Hela细胞进行24 h和48 h的处理,CCK-8法检测药物对细胞毒性的影响,q-PCR检测药物对各组细胞内MTSS1基因的表达影响,并通过Western印迹法检测MTSS1蛋白的表达改变以及ERK和AKT蛋白磷酸化水平以鉴定细胞增殖能力。结果1. q-PCR结果显示,中晚期宫颈癌组织中MTSS1基因表达水平明显高于正常宫颈组织及早期宫颈癌组织(P0.01),三组间有明显统计学差异(P0.01)：Western印迹结果显示,MTSS1蛋白的表达在宫颈癌组织中与病患年龄、癌组织分化程度以及淋巴结转移均无明显相关性(P0.05),但与临床分期相关(P0.01)。2q-PCR结果显示,随着临床分期的升高,MTSS1、 Ptch、Smo及Glil基因表达水平逐渐升高,其中中晚期宫颈癌组中四个基因mRNA表达量均最高(P0.01)：Western印迹结果显示,中晚期宫颈癌组中MTSS1及Gli1蛋白表达均高于早期宫颈癌组及正常宫颈组(P0.05),且各组间差异有统计学意义；免疫组化检测MTSS1 及Gli1蛋白在宫颈癌组较正常组中的表达增强,其中中晚期宫颈癌组中两者多为强阳性表达。3.不同浓度DDP处理Hela细胞24 h或48 h, CCK-8法测得DDP明显抑制Hela细胞增殖(P0.05),细胞的半数抑制浓度(IC50)值分别为4.14 μmol·L-1和11.82μmol·L-1; q-PCR结果显示,MTSS1勺基因表达水平与DDP间存在明显的浓度效应关系(相关系数r24h=-0.965, P0.01;r48h=-0.953, P0.01); Western印迹法结果表明,p-ERK. p-AKT及胞内MTSS1蛋白表达水平均随DDP浓度增加显著下降(P0.01)。结论1. MTSS1的表达水平与宫颈癌的临床分期有相关性,该基因可能在宫颈癌的发生发展中起着重要的作用。2.宫颈癌发生发展中MTSS1的表达与Shh信号调控相一致,均随癌症发展表达增强,可能同为预测宫颈癌发生发展的监测指标与潜在的治疗靶点。3.DDP可能通过下调MTSS1的表达水平并抑制ERK和AKT信号通路的激活而抑制宫颈癌Hela细胞的增殖。
【关键词】：宫颈癌 转移抑制基因1 临床分期 Shh信号通路 细胞增殖
【学位授予单位】：中国人民解放军医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.33
【目录】：

• 中英文缩略词表5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-15
• 第一部分 宫颈组织中MTSS1基因的表达15-26
• 一、材料15-16
• 二、实验方法16-22
• 三、结果22-24
• 四、讨论24-26
• 第二部分 宫颈癌组织MTSS1基因与Shh信号通路的关系26-33
• 一、材料26
• 二、实验方法26-28
• 三、结果28-31
• 四、讨论31-33
• 第三部分 顺铂对Hela细胞中MTSS1基因及信号通路ERK、AKT表达的影响33-43
• 一、材料33-35
• 二、实验方法35-37
• 三、结果37-41
• 四、讨论41-43
• 全文总结43-44
• 参考文献44-48
• 文献综述48-59
• 参考文献53-59
• 攻读学位期间发表文章情况59-60
• 致谢60

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本文编号：1093578