BLU基因在胃癌中的表达及其甲基化调控机制的实验研究

发布时间：2017-10-27 01:10

  本文关键词：BLU基因在胃癌中的表达及其甲基化调控机制的实验研究

  更多相关文章： 胃癌 BLU DNA甲基化 肿瘤抑制基因 Sp1

【摘要】：背景与目的肿瘤抑制基因BLU的表观遗传学沉默与多种恶性肿瘤的发生密切相关,然而,BLU在胃癌中的表达及其生物学功能尚无相关报道。本研究旨在初步探讨BLU基因在胃癌中的表达变化及其甲基化调控机制。方法(1)用实时定量PCR(q RT-PCR)法检测52例胃癌组织及对应的癌旁组织、6株胃癌细胞(SGC7901,HGC27,BGC823,MKN45,MGC803,AGS)及胃黏膜正常上皮细胞GES-1中BLU m RNA表达水平,Western blot法检测7株细胞中BLU蛋白表达水平;(2)采用Promoter Scan program软件预测BLU核心启动子区,并通过双荧光素酶报告基因实验进行验证,采用TFSEARCH和Methyl Primer Express#174;Software v1.0软件预测BLU核心启动子区中可能有转录因子结合的功能性Cp G位点;(3)重亚硫酸盐测序PCR(BSP)法分析胃癌细胞和组织中BLU核心启动子区Cp G位点的甲基化程度,初步分析DNA甲基化和BLU基因表达的关系,找出潜在的功能性Cp G位点;(4)去甲基化药物处理AGS和SGC7901细胞,q RT-PCR和Western blot法分析处理后BLU表达变化;(5)si RNA干扰Sp1表达及双荧光报告基因实验,分析BLU表达是否受转录因子Sp1调控;(6)在AGS和SGC7901细胞中,通过染色质免疫共沉淀(Ch IP)方法分析Sp1能否与BLU启动子区结合,采用电泳迁移率实验(EMSA)及双荧光素酶报告基因实验分析SGC7901细胞中BLU-39Cp G位点甲基化对Sp1结合能力的影响;(7)通过CCK-8实验及平板克隆形成实验,研究BLU表达下调对胃癌细胞SGC7901增殖能力及克隆形成能力的影响。结果(1)6株胃癌细胞中BLU表达水平均显著低于胃黏膜正常上皮细胞株GES-1,69.2%(36/52)的胃癌组织中BLU m RNA表达明显低于对应癌旁组织,且胃癌组织临床病理特征均与BLU表达之间无显著相关性;(2)BLU基因核心启动子区位于-181~+63bp,软件预测出-85Cp G和-39Cp G是潜在的功能性Cp G位点;(3)胃癌细胞和组织中BLU表达水平与其启动子区甲基化水平(尤其是-39Cp G位点的甲基化)负相关,提示-39Cp G是潜在的功能性Cp G位点;(4)去甲基化药物处理AGS和SGC7901细胞后,BLU表达出现不同程度的恢复;(5)BLU转录受转录因子Sp1的激活;(6)Sp1结合于BLU近端启动子区(-43~35bp),且其结合位点“GC box”中-39Cp G位点的甲基化可降低其结合能力,进而阻碍BLU基因的转录及表达;(7)通过si RNA干扰BLU的表达之后,SGC7901细胞的增殖能力和平板克隆形成能力显著提高。结论(1)BLU基因在胃癌中的失活与其核心启动子(尤其是-39Cp G位点)高甲基化有关;(2)转录因子Sp1可激活BLU的转录,-39Cp G位点甲基化可阻碍Sp1结合于BLU启动子区,这可能是胃癌中BLU基因沉默的机制之一;(3)BLU可抑制胃癌细胞的生长,是胃癌潜在的抑癌基因,且去甲基化药物处理可恢复其表达。BLU有望成为胃癌诊断和表观遗传学治疗靶点。
【关键词】：胃癌 BLU DNA甲基化 肿瘤抑制基因 Sp1
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.2
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 前言9-11
• 材料和方法11-37
• 结果37-48
• 讨论48-51
• 结论51-52
• 参考文献52-57
• 综述：抑癌基因BLU甲基化与肿瘤的关系57-67
• 参考文献62-67
• 中英文对照缩略词表67-68
• 攻读学位期间公开发表的论文68-69
• 致谢69-70

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本文编号：1101255