不同HER-2水平的人乳腺癌BT474细胞内miRNAs表达谱及相关miRNAs对癌细胞生物学行为的影响

发布时间：2017-10-27 02:03

  本文关键词：不同HER-2水平的人乳腺癌BT474细胞内miRNAs表达谱及相关miRNAs对癌细胞生物学行为的影响

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【摘要】：目的:利用不同HER2水平的人乳腺癌细胞筛选出HER2相关的差异性表达谱,为mi RNAs通过参与HER2信号通路从而参与调控乳腺癌细胞生物学行为的机制提供研究基础。方法:1.用脂质体介导的干扰RNA技术沉默人乳腺癌细胞株BT474中HER2基因的表达,应用mi RNA基因芯片技术,获得mi RNAs在人乳腺癌细胞BT474和BT474/si RNA HER2内的表达谱。2.筛选出具有显著表达差异的hsa-mi R-1827和hsa-mi R-3653,应用实时定量逆转录聚合酶链反应技术(quantitative real-time reverse transcription polymerase chain reaction,q RT-PCR)检测验证其在BT474和BT474/si RNA HER2细胞内mi RNAs的差异性表达。3.分别转染外源性hsa-mi R-1827 mimics和hsa-miR-3653 ASO。通过MTT法检测细胞的增殖能力;采用Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭能力;并应用细胞划痕实验和Transwell迁移实验检测细胞的迁移能力。4.应用生物信息学对hsa-mi R-1827和hsa-mi R-3653进行与HER2相关的信号通路的初步预测。结果:1.mi RNAs芯片结果显示:在人乳腺癌BT474细胞和BT474/si RNA HER2细胞内,差异表达的mi RNAs变化倍数2倍且具有统计学意义(P0.05),有338个mi RNAs与HER2相关;其中hsa-mi R-345-3p、hsa-mi R-4292、hsa-mi R-4755-5p和hsa-mi R-1827等110个mi RNAs上调,hsa-mi R-208a-3p、hsa-mi R-3074-3p、hsa-mi R-4460和hsa-mi R-3653等228个mi RNAs下调。2.应用q RT-PCR技术检测验证:与细胞株BT474相比,在BT474/si RNA HER2内,hsa-mi R-1827显著上调,hsa-mi R-3653显著下调(P0.05)。3.BT474细胞转染hsa-mi R-1827 mimics后显示划痕之后24h、48h其愈合速度明显慢于NC组,hsa-mi R-3653 ASO组划痕愈合速度明显慢于ASO NC组。4.BT474细胞转染hsa-mi R-1827 mimics后细胞增殖活力与转染NC组相比显著下调;BT474细胞转染hsa-mi R-3653 ASO后细胞增殖活力与转染ASO NC组相比明显下调。5.BT474细胞转染hsa-mi R-1827 mimics组侵出小室的细胞数与NC组相比明显减少,而BT474细胞转染hsa-mi R-3653 ASO组侵出小室的细胞数与ASO NC组相比明显减少。6.生物信息学方法预测hsa-mi R-1827和hsa-mi R-3653信号通路可能与HER2直接或间接相关联。结论:1.干预人乳腺癌细胞BT474 HER2水平可获得mi RNA表达谱。2.下调人乳腺癌细胞BT474 HER2水平,可使hsa-mi R-1827表达上调,相反,hsa-mi R-3653下调。3.hsa-mi R-1827可抑制乳腺癌细胞的增殖、转移和迁移能力,hsa-mi R-3653可增强乳腺癌细胞的增殖、转移和迁移能力。4.生物信息学预测提示hsa-mi R-1827和hsa-mi R-3653可能通过与HER2相关信号通路调控肿瘤的发生发展。
【关键词】：乳腺肿瘤 miRNAs HER-2 hsa-miR-1827 hsa-miR-3653
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.9
【目录】：

• 英文缩略词表5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 1 引言11-13
• 2 材料与方法13-28
• 3 结果28-40
• 4 讨论40-46
• 6 结论46
• 7 小结46-47
• 参考文献47-52
• 附录52-54
• 致谢54-55
• 综述55-62
• 参考文献60-62

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本文编号：1101422