转录因子SOX2、OCT4在胃癌组织中的表达及过表达SOX2对胃癌细胞生物学特性影响的研究

发布时间：2017-10-27 05:12

  本文关键词：转录因子SOX2、OCT4在胃癌组织中的表达及过表达SOX2对胃癌细胞生物学特性影响的研究

  更多相关文章： 胃癌组织 SGC7901 性别决定相关基因簇2(SOX2) 分化程度

【摘要】：目的:肿瘤组织的分化程度是决定胃癌预后的重要因素,本研究检测胃癌组织中SOX2和OCT4的表达,并探讨其与胃癌患者临床病理因素及预后的关系及意义。并诱导生成过表达SOX2的SGC7901-hSox2细胞株。研究过表达SOX2影响胃癌细胞生物学特征的表现和分子机制。方法:1.通过荧光定量PCR、Western-bloting、免疫组化技术检测60例不同分化程度的胃癌组织与正常胃粘膜组织中SOX2和OCT4的mRNA和蛋白的表达情况。2.分析SOX2和OCT4基因的表达水平与患者临床病理参数的关系。3.构建含SOX2基因的质粒载体,将慢病毒感染SGC-7901培养得到稳转株SGC7901-hSox2细胞。4.各种细胞功能试验,如Transwell细胞侵袭实验、细胞划痕实验、细胞耐药实验,裸鼠体内成瘤实验,依次检测过表达SOX2对胃癌细胞生物学特性的影响。5.荧光定量PCR、western bloting检测过表达SOX2的胃癌细胞中PI3K/Akt信号转导通路调控基因PTEN及干性标记基因的表达变化。结果:1.荧光定量PCR、Western-bloting检测显示,高分化胃癌组织SOX2 mRNA和蛋白的相对表达量与正常胃黏膜组织比较差异无统计学意义(t=0.1033,P0.05,t=0.116,P0.05),但显著高于中分化胃癌组织(t=12.48,P0.05,t=22.78,p0.05)和低分化胃癌组织(t=17.56,p0.05,t=30.00,p0.05),差异有统计学意义。高分化胃癌组织oct4mrna和蛋白的相对表达量与正常胃黏膜组织比较差异无统计学意义(t=2.436,p0.05,t=1.064,p0.05),但显著低于中分化胃癌组织(t=13.23,p0.05,t=25.56,p0.05)和低分化胃癌组织(t=12.10,p0.05,t=69.48,p0.05),差异有统计学意义。2.免疫组化显示高分化胃癌组织中sox2的阳性表达率(10/21)高于中分化胃癌组织(7/20)和低分化胃癌组织(2/19)(p0.05),高分化胃癌组织中oct4的阳性表达率(2/21)低于中分化胃癌组织(6/20)和低分化胃癌组织(12/19)(p0.05)。3.与临床病理参数相比较,胃癌中sox2,oct4蛋白的表达与患者的性别、年龄无关,无统计学差异(p0.05)。与病理分期、浸润程度、淋巴结转移数目相关(p0.05)。4.成功诱导得到胃癌细胞稳转株sgc7901-hsox2,transwell细胞侵袭实验提示sgc7901-hsox2组与sgc7901组、sgc7901-zpp组相比较,细胞的穿膜能力显著减弱(t=18.58,p0.05,t=18.19,p0.05)。细胞划痕实验表明sgc7901-hsox2组的迁移能力低于空白、对照组(t=2.999,p0.05,t=4.635,p0.05),细胞耐药实验结果为:sgc7901-hsox2组对l-ohp和5-fu的ic50均低于对照、空白组(p0.05),裸鼠成瘤实验提示:sgc7901-hsox2组细胞的致瘤性较空白、对照组降低(t=9.204,p0.05,t=15.78,p0.05)。5.荧光定量pcr、western bloting实验结果示:sgc7901-hsox2组细胞的pi3k-akt信号通路的调控基因pten相对表达水平与空白、对照组相比明显升高。差异具有统计学意义(p0.05)。然而过表达基因sox2的胃癌细胞中干细胞表面标记物oct4、c-myc、cd44无明显变化(p0.05)。结论:1.不同分化程度胃癌组织的sox2表达水平不同,分化程度越高,sox2表达水平越高,提示sox2在胃上皮细胞的分化过程中起了明显的作用,在胃癌的演变过程中具有抑癌基因的功能。2.胃癌组织分化程度越低,oct4的mrna及蛋白的表达量越高,低分化胃癌组织的OCT4表达水平明显高于中、高分化胃癌组织,OCT4基因的表达与胃癌细胞的分化程度密切相关。3.SOX2基因的低表达水平和OCT4的高水平表达可能促进胃癌的进展和侵袭,有望成为胃癌临床诊断、治疗和愈后生存期的一个指标。4.过表达SOX2胃癌细胞的侵袭迁移、增殖能力及致瘤性明显降低,5.SOX2可能通过PTEN下调PI3K/AKT信号通路来改变胃癌细胞的生物学特性。
【关键词】：胃癌组织 SGC7901 性别决定相关基因簇2(SOX2) 分化程度
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.2
【目录】：

• 英文缩略词6-7
• 中文摘要7-10
• ABSTRACT10-13
• 前言13-15
• 材料与方法15-35
• 1 主要材料15-21
• 1.1 组织标本15
• 1.2 细胞株来源15
• 1.3 质粒来源15-16
• 1.4 主要仪器和设备16-17
• 1.5 主要试剂17-19
• 1.6 主要试剂的配制19-21
• 1.7 PCR引物21
• 2 实验方法21-35
• 2.1 组织标本采集21
• 2.2 细胞培养21-22
• 2.3 慢病毒包装22-23
• 2.4 慢病毒生物学滴度测定23-24
• 2.5 慢病毒感染SGC7901并诱导稳转株SGC7901-hsox2，，稳转株SGC7901-zpp24-25
• 2.6 总RNA提取及m RNA逆转成cDNA25-27
• 2.7 实时荧光定量PCR（染料法）27-28
• 2.8 Western-bloting实验28-31
• 2.9 免疫组化检测31-32
• 2.10 胃癌细胞的成瘤实验32
• 2.11 Transwell实验检测细胞侵袭性32-33
• 2.12 细胞划痕实验33-34
• 2.13 MTs实验检测增殖能力34
• 2.14 统计学方法34-35
• 实验结果35-49
• 1. 不同分化程度胃癌组织中转录因子SOX2、OCT4的表达35-39
• 1.1 Real-time PCR检测胃癌组织中SOX2、OCT4基因mRNA的表达35-36
• 1.2 Western-bloting检测胃癌组织中SOX2、OCT4蛋白的表达36-37
• 1.3 免疫组织化学结果37-38
• 1.4 免疫组化胃癌组织中SOX2、OCT4的表达与临床病理参数的比较38-39
• 2. 过表达SOX2对胃癌细胞肿瘤特性的影响39-49
• 2.1 慢病毒滴度测定结果39-40
• 2.2 慢病毒转染SGC7901及 构建稳转细胞稳转株SGC7901-hsox2、稳转株SGC7901-ZPP40-41
• 2.3 稳转株SGC7901-hsox2的PCR鉴定结果41-42
• 2.4 MTS法检测过表达Sox2对胃癌细胞的耐药性影响。42
• 2.5 Transwell细胞侵袭实验42-43
• 2.6 细胞划痕实验43-44
• 2.7 荧光定量PCR44-46
• 2.8 Western Blot结果46-47
• 2.9 胃癌细胞的裸鼠成瘤实验47-49
• 讨论49-52
• 结论52-53
• 参考文献53-55
• 综述55-62
• 参考文献60-62
• 致谢62

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 于成功,李敏,莫剑忠,萧树东;胃癌细胞垂体腺苷环化酶激活肽相关受体分析[J];胃肠病学;2000年02期

2 薛英威,耿敬姝,刘晓民,刘立人,高小敏,陈国林,张岂凡,赵家宏;胃癌细胞的流式分析及临床意义[J];肿瘤防治研究;2000年03期

3 陈坚,林庚金,钱立平,程建,施冬云,张亚东,刘珊林;内源性活性氧水平及锰型超氧化物歧化酶的表达与胃癌细胞分化、增殖相关[J];生物物理学报;2003年02期

4 李莹,药立波,韩炯,王立峰,韩月恒,刘新平,林树新,俞强;胃癌细胞抗脱落凋亡的分子机制[J];医学分子生物学杂志;2004年02期

5 罗和生,王维,包鹏辉,张翼;核因子-κB活性增强参与胃癌细胞长春新碱耐药[J];中华消化杂志;2004年08期

6 刘冀红,曹伟新,纪玉宝,张轶,刘炳亚,朱正纲,燕敏,林言箴;右旋甲硫氨酸对胃癌细胞作用初探[J];肠外与肠内营养;2005年01期

7 齐元玲;于皆平;刘启胜;邓全军;曹俊;于红刚;;抑癌基因PTEN在胃癌细胞中的表达及意义[J];广东医学;2006年03期

8 何必立;吕宾;徐毅;苗青;范一宏;;温郁金对胃癌细胞的抑制作用及其对血管内皮生长因子表达的影响[J];中医药学刊;2006年09期

9 郭强;李荣;李庆芳;夏绍友;杜晓辉;王立生;;高表达鞘氨醇激酶对胃癌细胞生物学特性的影响[J];解放军医学杂志;2006年12期

10 陈先来;肖晓旦;杨荣;刘建平;;基于误差反向传播神经网络的胃癌细胞识别研究[J];中国循证医学杂志;2007年09期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 韩霜;雷婷;韩者艺;刘杰;郭雪艳;丁睿;吴开春;丁杰;樊代明;;分化抑制因子1对胃癌细胞恶性生物学行为的影响[A];中华医学会第七次全国消化病学术会议论文汇编（下册）[C];2007年

2 陈韶华;吴灵娇;吴鸿儒;吴雅春;厉有名;;低浓度酒精对胃癌细胞活性及周期抑制[A];中华医学会第12次全国内科学术会议论文汇编[C];2009年

3 陈韶华;吴灵娇;吴鸿儒;吴雅春;厉有名;;低浓度酒精对胃癌细胞活性及周期抑制[A];第二届浙江省消化病学术大会论文汇编[C];2009年

4 李娜;郭瑞芳;李文梅;邵建敏;汪浩;赵康;李书婷;王敬强;王融;徐宁志;刘斯奇;吕有勇;;大蒜素处理在胃癌细胞中引发的蛋白质表达响应[A];中国蛋白质组学第二届学术大会论文摘要论文集[C];2004年

5 ;多西紫杉醇对胃癌细胞作用及其机制的研究[A];第四届中国肿瘤大会中国药理学会肿瘤药理专业委员会分会场学术会议论文摘要[C];2006年

6 楼俪泓;;15-羟基前列腺素脱氢酶对胃癌细胞周期影响的试验研究[A];中华医学会第七次全国消化病学术会议论文汇编（下册）[C];2007年

7 朗玮;;中药方剂1号对胃癌细胞体外生长及细胞粘附分子的影响[A];浙江省中西医结合学会消化专业第八次学术年会暨省中西医结合消化系疾病新进展学习班论文汇编[C];2007年

8 巩龙静;马君;周涵婧;郑荣儿;;胃癌细胞的表面增强拉曼光谱研究[A];中国光学学会2011年学术大会摘要集[C];2011年

9 谢少茹;沈洪;赵崧;张国新;郝波;刘增巍;施瑞华;;黄芪多糖对胃癌细胞的抑制作用及其机制[A];中华中医药学会脾胃病分会第十九次全国脾胃病学术交流会论文汇编[C];2007年

10 刘文超;任军;张学庸;刘智广;张晓楠;;防御素对胃癌细胞杀伤的体外实验研究[A];2000全国肿瘤学术大会论文集[C];2000年

中国重要报纸全文数据库 前8条

1 记者 陆叶清;发现抑制胃癌细胞的重要基因[N];上海科技报;2010年

2 衣晓峰　乔蕤琳 记者 赵宇清;抑制胃癌细胞生长研究有新发现[N];黑龙江日报;2010年

3 记者 衣晓峰　通讯员 乔蕤琳;维生素E衍生物能抑制胃癌细胞生长[N];健康报;2010年

4 王振岭;我国抑制胃癌细胞生长研究有重要发现[N];中国医药报;2002年

5 王振岭;抗癌药抑制胃癌细胞生长研究获重要发现[N];中国中医药报;2002年

6 王振岭;7种抗癌药体外抑制胃癌细胞的研究有新发现[N];医药经济报;2002年

7 张中桥;胃癌细胞MDR机制研究取得新进展[N];中国医药报;2007年

8 吴一福 苏玉军;白藜芦醇可诱导胃癌细胞脱落凋亡[N];中国医药报;2005年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 李双玲;IGF-1通过抑制Fox01核保留促进胃癌细胞生长机制的研究[D];山东大学;2015年

2 巨大维;白细胞介素8在胃癌细胞侵袭中的作用及消痰散结方的干预研究[D];第二军医大学;2011年

3 董召刚;瘦素对胃癌细胞侵袭和迁移的影响及机制研究[D];山东大学;2013年

4 蔡爱珍;乙酰肝素酶调节胃癌细胞功能及其基因表达谱变化研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2010年

5 宋舟;Sonic hedgehog信号通路在干样胃癌细胞中的作用[D];中国人民解放军军医进修学院;2011年

6 李明;两个新胃癌细胞表面分子标志物的发现及鉴定[D];南京医科大学;2012年

7 刘天舒;骨桥蛋白对胃癌细胞生长、侵袭以及对化疗药物敏感性的影响[D];复旦大学;2007年

8 赵贵君;溶血磷脂酸对胃癌细胞的增殖迁移作用及其信号通路[D];内蒙古大学;2012年

9 赵立杰;小白菊内酯对胃癌细胞增殖抑制和诱导凋亡作用的研究[D];中国医科大学;2008年

10 何婷婷;高低分化的胃癌细胞内高尔基体的蛋白质组学研究[D];重庆医科大学;2010年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 林光锬;CyclinA/CDK2介导BAG3 Ser291位点的磷酸化并影响胃癌细胞的增殖和凋亡[D];福建医科大学;2015年

2 蔡洙哲;p12-LOX对胃癌细胞MKN-28的增殖和迁移的影响[D];延边大学;2015年

3 李龙;Her-2高表达对胃癌细胞侵袭、迁移的影响[D];长江大学;2015年

4 赵婷婷;GPIbα对胃癌细胞粘附、迁移和侵袭能力的影响及其机制的初步探讨[D];兰州大学;2015年

5 谢瑞霞;盘状结构域受体1调控上皮—间质转化影响胃癌侵袭转移分子机制的研究[D];兰州大学;2015年

6 王东仓;NM23-H2通过抑制Wnt/β-catenin信号通路抑制胃癌细胞的侵袭迁移[D];兰州大学;2015年

7 朱瑞雪;NDRG2基因对胃癌细胞恶性表型的影响[D];郑州大学;2015年

8 董凯楠;内质网应激对胃癌细胞侵袭迁移能力的影响[D];郑州大学;2015年

9 单争争;二甲双胍在IL-6诱导胃癌细胞EMT中的作用[D];郑州大学;2015年

10 田莉;NM23-H2通过诱导自噬抑制胃癌细胞EMT的发生[D];兰州大学;2015年

本文编号：1102053