肝癌细胞MGMT表达水平与奥沙利铂敏感性的相关性

发布时间：2017-10-27 11:06

  本文关键词：肝癌细胞MGMT表达水平与奥沙利铂敏感性的相关性

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【摘要】：目的:探讨肝癌细胞MGMT表达水平与OXA敏感性的相关性。方法:采用体外培养肝癌细胞株Bel-7402、SMMC-7721、HUH-7。用RT-PCR法检测MGMT的mRNA表达水平;Western-Blot方法检测MGMT蛋白的基础表达水平;MTT法计算各肝癌细胞的IC50;对比肝癌细胞MTT,并通过甲基化特异性PCR,检测所有细胞的MGMT甲基化的状态;Western-Blot方法检测加OXA后r-H2Ax的表达来评价DNA损伤程度;流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:各肝癌细胞系均可检测到MGMT基因和蛋白的表达,其中HUH-7 MGMT的mRNA以及蛋白水平最高;而Bel-7402的MGMT的mRNA以及蛋白水平最低,且三者的MGMT蛋白水平与mRNA水平呈正相关。根据MTT结果计算出HuH-7、SMMC-7721、Bel-7402对OXA的IC50分别为246.76μg/ml、48.43μg/ml以及31.35μg/ml,根据相关性分析得出MGMT的mRNA及蛋白表达水平与IC50呈正相关,即MGMT表达水平越高,其IC50值越大。MGMT的甲基化结果显示HuH-7的MGMT的甲基化表达水平最低,Bel-7402的MGMT的甲基化表达水平最高,根据相关性分析得出MGMT启动子甲基化水平与MGMT的mRNA与蛋白水平以及IC50呈负相关。加OXA12h后r-H2Ax均有不同程度表达,其中Bel-7402的r-H2Ax升高最明显而HuH-7升高最少。流式细胞仪检测凋亡,显示加入OXA后Bel-7402早期凋亡率最高,而HuH-7的凋亡率最低。结论:肝癌细胞中MGMT的mRNA及蛋白表达水平越高,OXA对其杀伤力越弱;肝癌细胞中MGMT的mRNA及蛋白表达水平越低,OXA对其杀伤力越强。肝癌细胞中MGMT启动子甲基化水平越高,对OXA越敏感;肝癌细胞中MGMT启动子甲基化水平越低,对OXA越不敏感。
【关键词】：肝癌 MGMT OXA 化疗敏感性
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-8
• 第一章 前言8-10
• 第二章 材料和方法10-25
• 1 材料10-19
• 4.MTT法检测肝癌细胞的IC_(50)19-20
• 5.MGMT基因CPG岛甲基化状态检测20-23
• 6.流式细胞仪检测细胞凋亡23-24
• 7.统计学处理24-25
• 第三章 结果25-31
• 3.1 肝癌细胞株中MGMT基因MRNA转录水平25
• 3.2 肝癌细胞株中MGMT蛋白表达水平25-26
• 3.3 肝癌细胞株对OXA的敏感性26-27
• 3.4 肝癌细胞株中MGMT启动子甲基化状态27-29
• 3.5 不同肝癌细胞经OXA治疗后γ-H2AX表达水平的差异29
• 3.6 流式细胞仪检测不同肝癌细胞的凋亡29-31
• 第四章 讨论31-33
• 第五章 结论33-34
• 参考文献34-36
• 综述36-51
• 参考文献45-51
• 攻读学位期间公开发表的论文51-52
• 中英文缩略词表52-53
• 致谢53-54

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本文编号：1103205