CHD1L通过抑制hMLH1的表达影响肝癌细胞SMMC7721增殖迁移和凋亡的研究

发布时间：2017-10-27 21:05

  本文关键词：CHD1L通过抑制hMLH1的表达影响肝癌细胞SMMC7721增殖迁移和凋亡的研究

  更多相关文章： Chromodomain helicase/ATPase DNA binding protein 1-like human mut Lhomolog 1 肝癌细胞

【摘要】：目的:探讨CHD1Lsi RNA下调CHD1L(Chromodomain helicase/ATPase DNA binding protein 1-like)基因的表达对肝癌细胞系SMMC7721中h MLH1(human mut L homolog 1)基因表达和其增殖、迁移、凋亡的影响。方法:1、CHD1Lsi RNA转染后,下调肝癌细胞系SMMC7721中CHD1L基因的表达后,检测h MLH1基因m RNA及蛋白表达水平的变化;2、采用CCK8实验、凋亡实验和Transwell迁移实验观察转染后肝癌细胞系SMMC7721增殖、凋亡和迁移的变化。3、统计分析采用SPSS17.0统计软件,计量资料采用(x±S)表示,所有实验数据均经两独立样本t检验进行分析,P0.05表示差异有统计学意义。结果:1、下调肝癌细胞系SMMC7721中CHD1L的表达后,h MLH1在m RNA和蛋白表达水平上调;2、下调肝癌细胞系SMMC7721中CHD1L的表达后,肝癌细胞SMMC7721的增殖、迁移受到抑制和其凋亡得到提高;结论:1、在肝癌细胞系SMMC7721中,下调CHD1L基因表达可能上调h MLH1的表达;2、在肝癌细胞系SMMC7721中,下调CHD1L基因表达抑制肝癌细胞增殖、迁移并促进其凋亡。
【关键词】：Chromodomain helicase/ATPase DNA binding protein 1-like human mut Lhomolog 1 肝癌细胞
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-9
• 第1章 前言9-11
• 第2章 材料与方法11-31
• 2.1 材料11
• 2.1.1 实验细胞11
• 2.2 主要实验试剂和耗材11-12
• 2.3 配制实验试剂12-13
• 2.4 主要的实验设备仪器13-14
• 2.5 细胞的培养14-17
• 2.5.1 细胞的传代14-15
• 2.5.2 细胞冻存15-16
• 2.5.3 细胞复苏16-17
• 2.6 提取细胞的总RNA和聚合酶链反应（PCR）17-20
• 2.6.1 细胞总RNA的提取17-18
• 2.6.2 RNA逆转录为cDNA18
• 2.6.3 梯度PCR选取最适的退火温度18-19
• 2.6.4 实时荧光定量PCR检测CHD1L和hMLH1的mRNA表达水平19-20
• 2.7 蛋白提取和Western blot检测CHD1L和hMLH1蛋白的表达20-24
• 2.7.1 细胞总蛋白的提取20
• 2.7.2 BCA法测定蛋白浓度20-21
• 2.7.3 SDS-PAGE凝胶电泳21-22
• 2.7.4 转膜22-23
• 2.7.5 免疫反应23
• 2.7.6 蛋白检测23-24
• 2.8 在SMMC7721细胞中转染siRNA后检测CHD1L和hMLH1的mRNA和蛋白的表达水平24-27
• 2.8.1 设计合成针对CHD1L基因特异性siRNA序列24
• 2.8.2 细胞转染24-25
• 2.8.3 最佳siCHD1L片段筛选25-26
• 2.8.4 实时荧光定量PCR分析转染siRNA后细胞的CHD1L和hMLH1的mRNA表达水平的变化情况26
• 2.8.5 Western blot分析转染siRNA后细胞的CHD1L和hMLH1的蛋白表达水平的变化情况26-27
• 2.9 CCK8法检测CHD1L对肝癌细胞系SMMC7721增殖的影响27-28
• 2.9.1 细胞分组与处理27
• 2.9.2 CCK8法检测细胞增殖情况27-28
• 2.10 凋亡实验检测CHD1L对肝癌细胞系SMMC7721凋亡的影响28-29
• 2.10.1 细胞分组和处理28
• 2.10.2 凋亡实验检测细胞的凋亡情况28-29
• 2.11 Transwell迁移实验检测对肝癌细胞系SMMC7721迁移能力的影响29-30
• 2.11.1 细胞分组和处理29
• 2.11.2 Transwell迁移实验检测细胞的迁移能力29-30
• 2.12 统计学分析30-31
• 第3章 结果31-37
• 3.1 CHD1LsiRNA转染肝癌细胞系SMMC7721对CHD1L蛋白表达的影响31-32
• 3.2 下调肝癌细胞系SMMC7721中CHD1L的表达后hMLH1的mRNA和蛋白表达水平上调32-33
• 3.3 下调肝癌细胞系SMMC7721中CHD1L的表达后，其增殖功能受到抑制33-34
• 3.4 下调肝癌细胞系SMMC7721中CHD1L的表达后，其凋亡率升高34-35
• 3.5 下调肝癌细胞系SMMC7721中CHD1L的表达后，，其迁移能力降低35-37
• 第4章 讨论37-40
• 4.1 CHD1L基因对肝癌细胞系SMMC7721增殖、迁移和凋亡的影响37-38
• 4.2 CHD1L基因对肝癌细胞系SMMC7721中hMLH1基因表达的影响38-40
• 第5章 结论40-41
• 致谢41-42
• 参考文献42-45
• 攻读学位期间的研究成果45-46
• 综述 CHD1L、hMLH1在肝癌中的最新研究进展46-54
• 参考文献52-54

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