糖基转移酶ppGalNAc-T1和-T2对三阴性乳腺癌浸润、转移及药物敏感性的影响

发布时间：2017-10-28 14:17

  本文关键词：糖基转移酶ppGalNAc-T1和-T2对三阴性乳腺癌浸润、转移及药物敏感性的影响

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【摘要】：目的三阴性乳腺癌由于雌激素受体(Estrogen receptor,ER)或孕激素受体(Progesterone receptor,PR)及人表皮生长因子受体2(Human epidermal growth factor receptor 2,HER2)均表达阴性而使临床使用的靶向治疗方案和内分泌治疗方案的效果不理想。寻找新的治疗靶点有助于提高临床的检测及时性和治疗可靠性,本文通过检测三阴性乳腺癌MDA-MB-231,Luminal A型乳腺癌细胞MCF-7及正常乳腺细胞MCF-12A中pp Gal NAc-Ts,α2,3唾液酸,MMPs的表达水平差异;并通过RNAi干扰pp Gal NAc-T1和T2后,检测三阴性乳腺癌中末端α2,3唾液酸,MMP14蛋白表达的变化,初步探讨pp Gal NAc-T1和-T2对TNBC糖基化及侵袭转移的作用。并通过化疗药和si RNA联合用药探讨O-聚糖末端唾液酸对TNBC药物敏感性及凋亡的影响。方法(1)通过Real-time PCR、Lectin blots、Western blots分别检测MDA-MB-231,MCF-7和MCF-12A中pp Gal NAc-Ts,MMPs及α2,3唾液酸链的表达差异。(2)RNAi干扰TNBC中高表达的pp Gal NAc-T1和-T2后,通过Real-time PCR、Lectin blot、Western blot及免疫沉淀检测总蛋白及MMP14蛋白表面α2,3唾液酸链的变化,并通过Transwell检测pp Gal NAc-T1和-T2对TNBC侵袭转移能力的影响。(3)通过化疗药处理MB-231,MB-231/si-T1和MB-231/si-T2细胞,MTT及Hoechst33258检测药敏感性及凋亡能力的变化,并通过流式细胞术检测各组细胞表面α2,3唾液酸的变化。(4)通过化疗药与si RNA联合作用,Transwell检测末端唾液酸糖链对乳腺癌侵袭能力的变化。结果(1)本研究检测发现三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞中高表达pp Gal NAc-T1,-T2,MMP14及α2,3唾液酸链且明显高于MCF-7及MCF-12A细胞。(2)RNAi干扰pp Gal NAc-T1和-T2后,三阴性乳腺癌中总蛋白及MMP14表面α2,3唾液酸链明显下调。抑制pp Gal NAc-T1和-T2表达后,MMP14和VEFG蛋白的表达降低,最终TNBC侵袭能力也随之降低。(3)MB-231/si-T1和MB-231/si-T2对化疗药的药物敏感性及凋亡能力明显高于对照组。流式细胞术显示α2,3唾液酸在处理组中明显降低。(4)化疗药和si RNA联合作用后,对三阴性乳腺细胞侵袭能力的抑制明显上升。结论(1)三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231中高表达pp Gal NAc-T1,-T2,MMP14及α2,3唾液酸且可能与其恶性程度密切相关。(2)干扰pp Gal NAc-T1和-T2,抑制O-糖基化起始能抑制末端α2,3唾液酸链,同时造成MMP14铰链区α2,3唾液酸的降低。α2,3唾液酸链可能与MMP14自降解及活化VEGF密切相关,且MMP14表达降低最终影响TNBC侵袭转移能力。(3)干扰糖基化起始而降低细胞表面致密性的末端α2,3唾液酸链,有助于化疗药与肿瘤细胞直接作用从而促进肿瘤细胞的药物敏感性及凋亡能力。(4)化疗药DOC和si RNA-pp Gal NAc-T1和-T2联合作用对抑制TNBC的侵袭能力具有显著作用。
【关键词】：三阴性乳腺癌 ppGalNAc-Ts α2 3唾液酸 MMP14 药物敏感性
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.9
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 前言9-20
• 1.乳腺癌分型9-10
• 2.O-GALNAC糖基化和糖基转移酶10-11
• 3.异常O-糖基化和肿瘤11-12
• 4.唾液酸与乳腺癌12-14
• 5.MMP14 与侵袭转移14-15
• 6.异常糖基化与药物敏感性15-16
• 参考文献16-20
• 第一部分 siRNA-PPGALNAC-T1和-T2对三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231中MMPS表达水平，O-糖链末端唾液酸化及侵袭转移能力的影响20-38
• 1.材料和方法21-23
• 2.方法23-27
• 3.结果27-34
• 4.讨论34-36
• 参考文献36-38
• 第二部分 化疗药吉西他滨和多西他赛对MDA-MB-231，，MB-231/si-T1 和MB-231/si-T2 细胞侵袭转移及药物敏感性的影响38-50
• 1.材料和方法38-40
• 2.方法40-42
• 3.结果42-46
• 4.讨论46-48
• 参考文献48-50
• 全文小结50-51
• 综述51-58
• 参考文献55-58
• 攻读学位期间本人出版或公开发表的论著、论文58-59
• 受资助的基金项目59-60
• 附录 中英文缩略词表60-62
• 致谢62-63

【参考文献】

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1 王静;彭灿;张延;;O-糖基化起始糖基转移酶的活性与结构研究[J];生命科学;2011年07期

本文编号：1108601