HMGB1诱导乏氧人肺腺癌A549细胞顺铂耐药及机制

发布时间：2017-10-28 22:24

本文关键词：HMGB1诱导乏氧人肺腺癌A549细胞顺铂耐药及机制

更多相关文章： HMGB1 乏氧 肺肿瘤 化疗耐药 自噬

【摘要】：原发性支气管肺癌(primary bronchopulmonary carcinoma),简称肺癌(lung cancer),是全世界发病率及死亡率最高的恶性肿瘤之一。肺腺癌是其中一种常见的病理类型,据统计,近年来在世界许多国家和地区肺腺癌的发病率已超过鳞癌,成为肺癌最常见的病理类型。然而,大多数患者确诊时已属晚期,因此,以铂类为基础的联合长春瑞滨、吉西他滨、多西他赛以及培美曲塞等二联化疗方案是EGFR基因突变阴性及TKI治疗失败患者的首要选择,然而,化疗耐药的出现严重影响化疗效果和患者预后。肿瘤化疗耐药的机制极为复杂,其中由于实体肿瘤血管生成速度常滞后于瘤细胞生长增殖的速度所形成瘤体内乏氧微环境引起了重视。Co Cl2是乏氧实验中常用的化学乏氧模拟剂,它能够使细胞线粒体内呼吸用氧障碍达到细胞乏氧的作用,近年研究发现肿瘤乏氧微环境下氧自由基减少可以直接影响化疗药物的作用机制,而且低氧还可以通过上调和下调一些靶基因通过多种间接途径影响肿瘤细胞的化疗敏感性。高迁移率族蛋白B1(high mobility group box-1,HMGB1)是细胞在周围乏氧、慢性炎及肿瘤相关成纤维细胞激活后产生的多种损伤相关模式分子中最重要的一种,不仅在多种肿瘤细胞中参与侵袭和转移,而且近期有学者在白血病的一项研究中发现,HMGB1可能通过活化P13KC3-MEK-ERK1/2信号途径上调LC3-II表达及增加p62的降解调节自噬影响肿瘤细胞的化疗耐药性。实体瘤乏氧环境下HMGB1释放明显增多,而目前研究发现HMGB1与肿瘤化疗耐药关系密切,那么乏氧环境下肺癌细胞化疗耐药的产生是否与HMGB1相关及其具体机制目前尚不清楚。研究目的:本实验旨在通过建立人肺腺癌A549细胞化学乏氧模型,探讨乏氧条件下HMGB1对A549细胞顺铂化疗敏感性的影响及其机制。研究方法:人肺腺癌A549细胞在Co Cl2(0、200μM)中培养24小时后,首先通过细胞免疫化学检测HIF-1α的表达来验证乏氧模型是否成功建立。然后,通过倒置相差显微镜观察A549细胞的形态,MTT法检测A549细胞的生长、增殖情况,ELISA检测化学乏氧条件下人肺腺癌A549细胞上清液中HMGB1蛋白的含量,CCK-8法测定化学乏氧条件下顺铂作用时A549细胞活性,进一步通过Western-blot检测自噬基因Beclin-1及LC3-II蛋白的表达。研究结果:1)Co Cl2乏氧组HIF-1α阳性A549细胞阳性积分及细胞核中HIF-1α蛋白表达均较常氧组增高;2)倒置相差显微镜下Co Cl2乏氧组与常氧组A549细胞均贴壁良好,Co Cl2乏氧组A549细胞数目较常氧组稀疏,部分形态不规则,可见多个伪足形成;3)与常氧组A549细胞相比,Co Cl2乏氧组A549细胞生长曲线较为低平、增殖速度缓慢;4)经顺铂处理后,Co Cl2乏氧组A549细胞存活率较常氧组A549细胞增高;5)ELISA检测结果显示Co Cl2乏氧组o Cl2组A549细胞上清液中HMGB1蛋白的表达较常氧组A549细胞增加;6)抑制HMGB1蛋白的活性能够增加Co Cl2乏氧组A549细胞顺铂化疗敏感性,而加入外源性HMGB1使Co Cl2乏氧组A549细胞顺铂化疗敏感性降低;7)Co Cl2乏氧组A549细胞中Beclin-1及LC3-II蛋白的表达随HMGB1蛋白的增加而增加,随HMGB1蛋白的减少而减少。结论:乏氧条件下HMGB1的表达增加可能通过上调自噬诱导人肺腺癌A549细胞顺铂化疗耐药,然而自噬在多大程度上参与HMGB1诱导的化疗耐药及具体机制还需进一步研究。
【关键词】：HMGB1 乏氧 肺肿瘤 化疗耐药 自噬
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R734.2
【目录】：

摘要4-7
abstract7-11
主要英文缩略词表11-12
引言12-15
实验流程图15-16
1 实验材料16-18
2 实验方法18-26
3 结果26-32
4 讨论32-35
5 结论35-36
参考文献36-39
综述肺癌化疗耐药的研究进展39-54
参考文献50-54
个人简历及在学期间发表的学术论文与研究成果54-55
致谢55

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