Mcl-1的小分子抑制剂UMI-77对胃癌细胞的促凋亡作用

发布时间：2017-10-29 01:25

  本文关键词：Mcl-1的小分子抑制剂UMI-77对胃癌细胞的促凋亡作用

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【摘要】：背景及目的：胃癌是我国消化系统中发病率和死亡率极高的恶性肿瘤之一,化疗是术后及部分晚期患者治疗的主要方式,但肿瘤对化疗药物的耐受导致治疗效果低下。细胞凋亡是普遍存在于机体的受多基因多信号途径严格控制的一种死亡方式,细胞凋亡调控异常与肿瘤的形成密切相关。Bcl-2家族成员蛋白是调控内源性凋亡的关键分子,Mcl-1是该家族中重要的抗凋亡蛋白,在抗肿瘤靶向研究中备受关注。本课题通过体外实验研究Mcl-1的小分子抑制剂UMI-77对胃癌细胞的作用,以期为小分子抑制剂应用于临床提供更多思路。方法：1.UMI-77的促凋亡作用：采用不同浓度UMI-77处理胃癌细胞MGC-803、HGC-27和GES-1人胃黏膜细胞。MTS和结晶紫染色检测UMI-77对细胞的生存、增殖以及克隆形成的影响。Annexin V/PI染色流式细胞术检测细胞凋亡率。2.UMI-77诱导胃癌MGC-803细胞凋亡机制研究：Western blot检测caspase-3、 caspase-9、PARP的裂解活化、Bcl-2家族蛋白的表达以及胞浆、线粒体中Smac、Cyt C蛋白的释放。JC-1染色流式细胞术分析UMI-77对细胞线粒体膜电位的影响。MTS法检测广谱caspases抑制剂(z-VAD-fmk)对UMI-77诱导MGC-803细胞凋亡的影响。3.沉默Mcl-1表达对UMI-77诱导凋亡的影响：特异性小干扰RNA沉默Mcl-1基因,将化学合成的Mcl-1 siRNA通过Lipofectamine 2000转染MGC-803细胞,Western blot检测Mcl-1基因的沉默效率。流式细胞术检测沉默Mcl-1对UMI-77诱导MGC-803细胞凋亡的影响。qRT-PCR检测三株细胞中Mcl-1、Bcl-2以及Bcl-XLmRNA表达水平。结果：1.UMI-77处理细胞后,三株细胞的生存、增殖以及克隆形成受到抑制。其中UMI-77对MGC-803细胞的抑制作用明显高于HGC-27、GES-1细胞。流式检测结果显示UMI-77可诱导胃癌细胞MGC-803凋亡,并具有时间剂量相关性；而UMI-77对HGC-27细胞的凋亡诱导作用不明显,未检测出凋亡的特征性改变。2.UMI-77作用后,MGC-803细胞线粒体膜电位下降,CytC、Smac在处理24 h后释放入胞浆；caspase-9、caspase-3和PARP在UMI-77处理24 h即显著活化,且z-VAD-fink能部分抑制UMI-77引起的细胞凋亡；Bcl-2、BcI-XL在UMI-77作用前后的蛋白表达水平没有明显改变,Mcl-1蛋白表达水平在UMI-77处理24 h后明显下调；3.转染Mcl-1 siRNA后MGC-803细胞中Mcl-1蛋白表达水平下调,而转染Mcl-1siRNA能部分抑制UMI-77诱导的细胞凋亡。结论：三株细胞对UMI-77敏感性存在差异；与HGC-27和GES-1细胞相比,UMI-77可诱导MGC-803细胞显著凋亡。线粒体膜电位改变以及线粒体蛋白Cyt C和Smac的释放表明UMI-77可诱导MGC-803细胞发生内源性凋亡。MGC-803对UMI-77的敏感性高于HGC-27和GES-1可能与其Mcl-1高表达有关。沉默Mcl-1表达可以部分抑制UMI-77诱导的凋亡,表明除了Mcl-1可能还存在其它调控参与UMI-77诱导的胃癌细胞凋亡。
【关键词】：胃癌 小分子抑制剂 Mcl-1 UMI-77 细胞凋亡
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.2
【目录】：

• 中英文缩略词表5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 1 引言12-16
• 2 实验材料16-22
• 3 实验方法22-31
• 4 实验结果31-43
• 5 讨论43-46
• 6 结论46-47
• 7 参考文献47-52
• 附录52-53
• 致谢53-54
• 综述54-64
• 参考文献60-64

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本文编号：1110816