血清uPA蛋白表达与AML预后及其相关信号通路的初步研究

发布时间：2017-10-29 16:05

  本文关键词：血清uPA蛋白表达与AML预后及其相关信号通路的初步研究

  更多相关文章： 急性髓系白血病 尿激酶型纤溶酶原激活物 血清标志物 预后分层 骨桥蛋白

【摘要】：一、研究背景及目的难治性急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)仍然是临床治疗的难题。在AML患者治疗过程中,各种具有肯定疗效的化疗药物在杀伤肿瘤细胞的同时,大量正常血细胞也会受到抑制,患者出血、感染等风险增加,甚至导致患者死亡;另外,为了评价患者对治疗的反应及化疗效果,需要对AML患者进行反复骨髓穿刺,骨髓穿刺为有创操作,这无疑增加了患者的痛苦。因此,为了让AML患者在治疗过程中最大获益,不断探寻新的靶向治疗手段及血清学预后判断指标成为了接下来的研究工作中亟待解决的重要问题。尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase plasminogen activator,u PA)是一种以酶原(pro-u PA)形式分泌的丝氨酸蛋白水解酶,通过与其特异性受体(u PAR,又称CD87)结合而被活化,与白血病细胞的髓外浸润及出血并发症的发生密切相关。但是,u PA蛋白是否与AML患者的预后相关至今仍不十分明确。骨桥蛋白(ostcopontin,OPN)是一种富含唾液酸的趋化因子,通过与CD44、αVβ3等多种细胞表面受体结合,参与肿瘤的发生发展过程。大量关于实体肿瘤的研究发现,OPN可通过整合素αvβ3/PI3K/NF-κB信号途径上调u PA蛋白表达,进而增加其对肿瘤细胞的侵袭转移、肿瘤血管生成及化疗耐药的作用。在AML中,OPN是否也同样具有促u PA蛋白表达作用?这一作用是通过什么途径得以实现?本课题在接下来的研究中通过对不同预后分层的AML患者治疗前血清u PA蛋白表达水平进行检测,以期为AML患者带来新的可靠的血清学预后判断指标。通过研究OPN及u PA蛋白在AML细胞表达的关系,进而深入探讨二者之间的相关信号通路,这将助于为AML患者靶向治疗带来新的思路和重要的理论依据。二、研究内容及方法1.探讨血清u PA蛋白表达与AML预后之间的关系1.1收集初治AML患者(非APL)及健康对照组外周血血清,根据细胞遗传学、染色体核型分析等相关预后判断指标对AML患者进行预后分层;1.2用ELISA的方法检测不同预后组患者初始治疗前血清u PA蛋白的表达水平;1.3采用SPSS 18.0软件对相关数据进行统计学分析。2.OPN促难治性AML细胞u PA蛋白表达及其信号通路的初步研究2.1培养MV4-11白血病细胞株(FLT3-ITD基因突变阳性),用不同浓度重组人骨桥蛋白(Recombinant Human Osteopontin,rh OPN)进行处理,Western blot检测各组u PA蛋白表达水平;2.2分别用PI3K及NF-κB抑制剂对MV4-11白血病细胞进行预处理,再用rh OPN进行处理,Western blot检测各组u PA蛋白表达水平;2.3运用Image J软件对条带进行灰度值分析,SPSS 18.0软件对相关数据进行统计学分析。三、研究结果:1.AML患者初始治疗前血清u PA蛋白表达水平明显高于健康对照组血清u PA蛋白表达量(P0.05);AML预后不良组患者血清u PA蛋白表达水平明显高于预后良好组及预后中等组患者血清水平(各P值均0.05);预后良好组与预后中等组患者血清u PA蛋白表达水平无明显差异(p0.05)。2.MV4-11白血病细胞u PA蛋白表达水平随刺激剂rh OPN浓度的增加而逐渐表达升高(各P值均0.05);OPN促u PA蛋白表达的作用被PI3-K抑制剂(LY294002)及NF-ΚB抑制剂(BAY 11-7082)抑制,且随加入LY294002及BAY 11-7082浓度增加,u PA蛋白表达下降更加明显(各P值均0.05)。四、研究结论:1.AML患者血清u PA蛋白表达与患者的不良预后有关;2.OPN蛋白具有促进白血病细胞u PA蛋白表达的作用,PI3-K及NF-κB是这一信号通路中的关键分子。
【关键词】：急性髓系白血病 尿激酶型纤溶酶原激活物 血清标志物 预后分层 骨桥蛋白
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R733.7
【目录】：

• 英文缩略词表4-6
• 英文摘要6-9
• 中文摘要9-11
• 第一章 前言11-13
• 第二章 血清uPA蛋白表达与AML预后有关13-22
• 2.1 材料与方法13-15
• 2.2 主要的试剂和仪器15-18
• 2.3 结果18-20
• 2.4 讨论20-22
• 第三章 OPN促MV4-11 白血病细胞uPA蛋白表达及信号通路的初步研究22-34
• 3.1 材料和方法22-29
• 3.2 结果29-31
• 3.3 讨论31-34
• 全文结论34-35
• 参考文献35-39
• 文献综述uPAS与肿瘤关系的研究进展39-52
• 参考文献47-52
• 硕士在读期间发表文章52-53
• 致谢53

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本文编号：1113661