TRAF6抑制结直肠癌转移通过调控β-catenin信号

发布时间：2017-10-29 20:33

  本文关键词：TRAF6抑制结直肠癌转移通过调控β-catenin信号

  更多相关文章： 结直肠癌 TRAF6 转移 β-catenin 降解

【摘要】：研究背景和目的结直肠癌是世界上第三大常见肿瘤,已成为危害我国居民健康的最常见恶性肿瘤之一,患者术后生存率较高,但总的预后并不理想;因结直肠癌细胞转移是结直肠癌发展进程中最为关键的事件,直接影响临床结直肠癌患者的治疗及预后,因此研究结直肠癌的转移机制及调控因子对改善患者预后具有重要意义。β-链蛋白(β-catenin)主要功能为介导细胞间黏附和参与基因的表达。在胞膜处与E-cadherin形成复合体,维持细胞的黏附、防止细胞的移动。细胞质中的β-catenin处于较低的水平,当其不能被GSK-3β/APC蛋白酶体途径、p53/Siah-1/APC蛋白酶体途径、自噬溶酶体途径降解时,β-catenin在细胞质中累积入核,与TCF及LEF-1结合,启动一系列的与肿瘤发生发展及转移等有关的基因转录,如ZEB1,E-cadherin等。肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)是TNFR和IL-1R/TLR两超家族诱导的信号汇合中心点,在TNF,IL-1,LPS等炎症因子的刺激下,激活TRAF6下游信号转导与调节中最重要的三条通路:NF-KB通路、MAPK通路和Src通路,这三条通路在调控细胞的存活、生长、增殖、分化、转移、凋亡等生物学行为发挥着重要作用,而且与骨肉瘤、神经胶质瘤、肺癌、胃癌等肿瘤的发生、发展、侵袭、转移过程密切相关。有报道称TRAF6可促进结直肠癌细胞的增殖,但其在结直肠癌侵袭转移中的作用及机制尚不清楚。在该课题中,我们着重研究了TRAF6在结直肠癌转移过程中的作用及其可能调控机制。研究方法Western Blot检测蛋白表达情况;逆转录-荧光定量PCR检测mRNA的水平;免疫组织化学技术和细胞免疫荧光检测蛋白表达及定位情况;用慢病毒载体培养和筛选TRAF6稳定干扰细胞株;Migration迁移实验、Invasion侵袭实验及构建裸鼠肺转移模型来检测细胞的侵袭转移能力;荧光报告基因检测β-catenin介导的Top-Flash活性。结果1、临床结直肠癌配对组织样本中,结直肠癌组织中TRAF6 mRNA水平及蛋白水平均低于癌旁正常组织,且相比无淋巴结转移的结直肠癌组织,有淋巴结转移的结直肠癌组织TRAF6蛋白表达显著降低。2、体、内外实验中,稳定干扰TRAF6后,细胞的侵袭及转移能力显著增高。3、人为改变TRAF6的表达可显著调控β-catenin的降解及其信号转导。即,过表达TRAF6后,β-catenin蛋白水平及其介导的转录活性降低,ZEB1蛋白表达下降;基因沉默TRAF6后,β-catenin蛋白水平升高且出现核定位的现象,同时ZEB1蛋白表达增强。进一步的研究还发现,稳定干扰TRAF6表达的同时再敲低β-catenin的表达,结直肠癌细胞的迁移、侵袭能力相比仅仅稳定干扰TRAF6的细胞显著下降。结论TRAF6在人结直肠癌组织中存在普遍的低表达,且与淋巴结转移紧密相关;下调TRAF6的表达可以显著地促进结直肠癌细胞的侵袭和转移;瞬时敲低β-catenin可以逆转稳定干扰TRAF6后所促进的结直肠癌细胞体外的迁移、侵袭能力;TRAF6可通过促进β-catenin的降解来抑制结直肠癌的转移能力。
【关键词】：结直肠癌 TRAF6 转移 β-catenin 降解
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.34
【目录】：

• 中文摘要4-6
• ABSTRACT6-11
• 第一章 前言11-17
• 1 结直肠癌简介11
• 2 肿瘤坏死因子受体相关因子 6（TRAF6）简介11-14
• 3 WNT/Β-CATENIN信号通路简介14-17
• 第二章 TRAF6通过调控 Β-CATENIN的降解抑制结直肠癌的转移17-49
• 第一节 在结直肠癌临床标本中检测TRAF6的表达17-25
• 一 材料与方法17-22
• （一）材料17
• （二）方法17-22
• 二 结果22-25
• 第二节 稳定敲低TRAF6对结直肠癌细胞体内外生物学行为的影响25-31
• 一 材料与方法25-28
• （一）材料25
• （二）方法25-28
• 二 结果28-31
• 第三节 TRAF6+/-对小鼠结直肠癌浸润的影响31-36
• 一 材料与方法31-33
• （一）材料31
• （二）方法31-33
• 二 结果33-36
• 第四节 TRAF6调控 Β-CATENIN的降解36-49
• 一 材料与方法36-42
• （一）材料36
• （二）方法36-42
• 二 结果42-49
• 讨论49-51
• 参考文献51-60
• 综述 TRAF6在肿瘤发生发展中的作用60-69
• 参考文献64-69
• 英文缩略词69-70
• 主要成果70-71
• 致谢71-73

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 陈锋;何生松;邱荣元;庞然;许娟娟;董继华;;Influence of Silencing TRAF6 with shRNA on LPS/TLR4 Signaling in vitro[J];Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences);2010年03期

2 辛利军;TRAF:一种重要的接头分子[J];国外医学(免疫学分册);2002年03期

3 李珊;杨桂文;安利国;;TRAF1以及它的生物学功能[J];科技信息(学术研究);2008年25期

4 ;TRAF-mediated regulation of immune and inflammatory responses[J];Science China(Life Sciences);2010年02期

5 王新禹;黄懿;李礼;魏群;;肿瘤坏死因子受体作用因子3(TRAF3)结构及生物学功能[J];中国生物化学与分子生物学报;2012年06期

6 孙利;王晓辉;关薇;唐刘君;王建;杨晓明;汪思应;;TRAF6-GST融合蛋白在大肠杆菌中的表达及纯化[J];生物技术通讯;2011年05期

7 张波;周芳亮;卢芳国;严杰;王成;周建林;张健;;过表达TRAF2降解外源性绿色荧光蛋白[J];中国生物化学与分子生物学报;2012年08期

8 王沂;张秀军;刘青;余源;慈雅丽;王洋;;人TRAF3IP3基因的克隆及真核表达[J];细胞与分子免疫学杂志;2013年05期

9 曾凡龙;卫荣华;朱敬;沈君豪;;以TRAF2为样本检验证实的一种通过模式关键位点研究未知蛋白质功能的方法[J];湖北医药学院学报;2013年05期

10 张文;张p，

本文编号：1114597