细胞自噬对腺花素诱导肝癌细胞死亡的影响

发布时间：2017-10-30 05:36

  本文关键词：细胞自噬对腺花素诱导肝癌细胞死亡的影响

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【摘要】：细胞自噬(autophagy)指自身细胞内的物质包括衰老的细胞器、细胞质成分以及长寿命蛋白通过双层膜样囊泡结构包裹、运送至溶酶体发生降解的过程。自噬广泛存在于真核细胞的生命活动中,在适应代谢应激、保持基因组完整性及维持内环境稳定方面发挥重要作用。一系列研究显示,自噬参与细胞死亡的发生与发展过程,其对细胞死亡的影响可能为促进、阻碍或无影响。最近,课题组在国际上首次报道,腺花素(Adenanthin),一种从腺花香茶菜叶子中提取的天然二萜类化合物,通过抑制过氧化还原酶I/II(peroxiredoxin I/II)活性,引起细胞内ROS累积从而选择性的诱导肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞死亡。目前的研究发现,ROS的累积通常能增强细胞的自噬活性,故本研究主要关注自噬在腺花素诱导的HCC细胞死亡中的作用。通过Western blot和免疫荧光技术发现,腺花素能够显著增强HCC细胞系Bel-7402细胞的自噬活性,表现为自噬重要标志分子LC3-II蛋白的明显累积、GFP-LC3和内源性LC3蛋白的聚集并呈现明显的点状分布于细胞浆内。利用RNA干预技术沉默Beclin-1基因的表达并不影响腺花素诱导的细胞自噬活性增强效应,同时也不影响腺花素引发的细胞死亡过程,提示腺花素诱导的HCC细胞自噬活性增强为非Beclin-1依赖的。进一步地,CCK-8结果显示,与野生型小鼠胚胎成纤维细胞(WT MEFs)相比,ATG5缺失(ATG5-/-)的MEF细胞对于腺花素诱导的细胞生长抑制效应更为抵抗;同样地,利用小RNA干预Bel-7402细胞中ATG5基因的表达,也明显拮抗腺花素诱导的细胞生长抑制效应,这些结果提示,腺花素增强的细胞自噬活性,能够促进其诱导的HCC细胞死亡效应。随着这些工作的开展,我们将深入认识腺花素选择性杀伤HCC细胞的潜在作用机制,并且为特异性靶向和杀伤肿瘤细胞的治疗策略提供更多的信息。
【关键词】：细胞自噬 腺花素 细胞死亡 肝细胞癌
【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 中文摘要5-6
• 英文摘要6-10
• 符号说明10-11
• 绪论11-16
• 方法与材料16-27
• 1、细胞培养与制剂16
• 2、质粒转染与siRNA瞬转敲除16-17
• 3、免疫荧光和共聚焦显微镜17-18
• 4、细胞加药处理及细胞收集、蛋白裂解18-19
• 5、免疫印迹技术19-22
• 6、病毒包装与细胞系构建22-24
• 7、显微镜摄片24
• 8、CCK-8 法检测IC5024-25
• 9、抗体及试剂、仪器25-27
• 结果27-37
• 1、腺花素显著增强肝细胞癌细胞的自噬活性27-31
• 2、腺花素诱导的HCC细胞自噬活性增强不依赖于Beclin-1 的表达31-34
• 3、自噬活性丧失的ATG5~(-/-) MEFs对腺花素诱导的细胞生长抑制效应更为抵抗34-35
• 4、干预ATG5表达的Bel-7402细胞明显抵抗腺花素诱导的细胞生长抑制效应35-37
• 讨论37-39
• 结论39-40
• 参考文献40-46
• 致谢46-48
• 硕士期间发表和待发表论文目录48

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本文编号：1116355