乳腺癌细胞内Mfn2基因沉默的表观遗传学机制的研究

发布时间：2017-10-30 11:18

  本文关键词：乳腺癌细胞内Mfn2基因沉默的表观遗传学机制的研究

  更多相关文章： 乳腺癌 MCF-7细胞 Mfn2基因 DNA甲基化 5-氮杂-2’-脱氧胞苷 甲基化特异性PCR

【摘要】：目的本研究通过解析Mfn2基因启动子区甲基化状态对其表达水平及细胞生物学特性的影响,旨在探讨在人乳腺癌细胞中Mfn2基因沉默的表观遗传学机制,为乳腺癌发病机制的理解及Mfn2基因作为乳腺癌治疗新靶点提供表观遗传学依据。方法1实时荧光定量PCR(RT-q PCR)法检测人乳腺癌细胞系MCF-7细胞和正常乳腺细胞系HBL-100细胞,及乳腺癌及癌旁组织中Mfn2 m RNA的表达水平;2采用甲基化特异性PCR(MSPCR)法检测MCF-7细胞和HBL-100细胞,及乳腺癌及癌旁组织中Mfn2基因启动子区甲基化状态;3不同浓度甲基化酶抑制剂5-aza-Cd R处理MCF-7细胞5天后,MSPCR法检测Mfn2基因启动子区甲基化的变化情况;RT-q PCR法检测Mfn2 m RNA表达水平的变化情况;细胞免疫化学染色法和western blot法检测Mfn2蛋白的表达水平变化情况;4不同浓度5-aza-Cd R处理MCF-7细胞1-5天内,MTT法检测MCF-7细胞生长增殖的变化情况;流式细胞术检测MCF-7细胞增殖及细胞周期的变化情况;倒置显微镜下观察MCF-7细胞的形态学变化。结果1与HBL-100细胞相比,MCF-7细胞中Mfn2 m RNA呈低水平表达,两者相比差异有统计学意义(P0.05);与对应的癌旁组织相比,7例乳腺癌组织中Mfn2 m RNA表达水平均较低,两者相比差异有统计学意义(P0.05);2与HBL-100细胞相比,MCF-7细胞中Mfn2基因启动子区呈高甲基化状态;7例癌旁组织中1例发生了甲基化,甲基化率为14.3%,7例乳腺癌组织中有6例发生了甲基化,甲基化率为85.7%,与癌旁组织的甲基化率相比有显著性差异(P0.05);3经5-aza-Cd R处理的MCF-7细胞内Mfn2基因启动子区甲基化水平降低,且呈浓度依赖趋势;经5-aza-Cd R处理的MCF-7细胞内Mfn2 m RNA和蛋白水平增高,亦呈浓度依赖趋势;4经5-aza-Cd R处理的MCF-7细胞,细胞的生长受到抑制;细胞周期阻滞在G2/M期;细胞的形态发生明显变化,细胞变圆、伸出伪足,甚至出现空泡、凋亡。这些生物学特性的改变呈浓度和时间依赖趋势。结论Mfn2基因启动子区的甲基化可能是其在乳腺癌细胞内沉默的重要表观遗传学调控机制。去甲基化处理可促进Mfn2的转录,提高m RNA和蛋白水平,进而抑制乳腺癌细胞增殖。本实验为将Mfn2作为治疗乳腺癌的新靶点提供了表观遗传学依据。
【关键词】：乳腺癌 MCF-7细胞 Mfn2基因 DNA甲基化 5-氮杂-2’-脱氧胞苷 甲基化特异性PCR
【学位授予单位】：华北理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.9
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 英文缩略表10-12
• 引言12-14
• 第1章 实验研究14-58
• 1.1 实验材料14-21
• 1.1.1 细胞株14
• 1.1.2 组织标本14
• 1.1.3 主要试剂14-16
• 1.1.4 主要仪器设备16
• 1.1.5 主要试剂配制16-21
• 1.2 实验方法21-41
• 1.2.1 MCF-7 细胞和HBL-100细胞Mfn2 mRNA水平检测21-25
• 1.2.2 乳腺癌和癌旁组织Mfn2 mRNA水平检测25-26
• 1.2.3 MCF-7 细胞和HBL-100细胞Mfn2基因甲基化状态检测26-31
• 1.2.4 乳腺癌和癌旁组织Mfn2基因甲基化状态检测31-32
• 1.2.5 5-aza-CdR对MCF-7 细胞Mfn2基因甲基化的影响32-34
• 1.2.6 5-aza-CdR对MCF-7 细胞Mfn2 mRNA表达水平的影响34-35
• 1.2.7 5-aza-CdR对MCF-7 细胞Mfn2蛋白表达水平的影响35-39
• 1.2.8 5-aza-CdR对MCF-7 细胞生物学特性的影响39-41
• 1.3 实验结果41-51
• 1.3.1 MCF-7 和HBL-100细胞中Mfn2 mRNA表达水平41-42
• 1.3.2 乳腺癌和癌旁组织中Mfn2 mRNA表达水平42-43
• 1.3.3 MCF-7 和HBL-100细胞中Mfn2基因甲基化状态43
• 1.3.4 乳腺癌和癌旁组织中Mfn2基因甲基化状态43-44
• 1.3.5 5-aza-CdR对MCF-7 细胞中Mfn2启动子区甲基化的影响44-45
• 1.3.6 5-aza-CdR对MCF-7 细胞中Mfn2 mRNA表达的影响45-47
• 1.3.7 5-aza-CdR对MCF-7 细胞中Mfn2蛋白表达的影响47-49
• 1.3.8 MTT法检测 5-aza-CdR对MCF-7 细胞增殖的影响49
• 1.3.9 流式细胞术检测 5-aza-CdR对MCF-7 细胞周期的影响49-51
• 1.3.10 5-aza-CdR对MCF-7 细胞形态学变化的影响51
• 1.4 实验讨论51-54
• 参考文献54-58
• 第2章 综述 DNA甲基化与乳腺癌关系的研究进展58-73
• 2.1 DNA甲基化58-59
• 2.2 DNA甲基化和乳腺癌相关基因59-65
• 2.2.1 ER基因59
• 2.2.2 PR基因59-60
• 2.2.3 p16基因60-61
• 2.2.4 APC基因61
• 2.2.5 RASSF1A基因61
• 2.2.6 BRCA1基因61-62
• 2.2.7 ATM基因62-63
• 2.2.8 CDH1基因63
• 2.2.9 NOEY2基因63
• 2.2.10 TIMP3基因63-64
• 2.2.11 WWOX基因64
• 2.2.12 1433R基因64-65
• 2.3 DNA甲基化对乳腺癌的临床意义65-67
• 2.3.1 DNA甲基化和乳腺癌诊断65-66
• 2.3.2 DNA甲基化和乳腺癌治疗66
• 2.3.3 DNA甲基化和乳腺癌预后66-67
• 参考文献67-73
• 结论73-74
• 致谢74-75
• 导师简介75-78
• 作者简介78-79
• 学位论文数据集79

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 黄啸原;用“印度阅兵”形容乳腺癌合适吗?[J];诊断病理学杂志;2001年02期

2 张嘉庆,王殊,乔新民;乳腺癌的现状和远景[J];中华外科杂志;2002年03期

3 张维彬,汪波,石灵春;中医药在现代乳腺癌治疗中的运用[J];中国中西医结合急救杂志;2002年01期

4 薛志勇;食物与乳腺癌[J];山东食品科技;2002年04期

5 王旬果,王建军,郑国华;乳腺癌相关标志物的研究进展[J];山东医药;2002年33期

6 陆尚闻;;男人也患乳腺癌[J];环境;2003年12期

7 ;新技术清晰拍摄早期乳腺癌细胞[J];上海生物医学工程;2005年04期

8 田富国;郭向阳;张华一;;乳腺癌诊治研究新进展[J];肿瘤研究与临床;2005年S1期

9 马涛,谷俊朝;血管内皮生长因子与乳腺癌的临床研究进展[J];国外医学(外科学分册);2005年01期

10 郭庆良,谷俊朝;乳腺癌和瘦素相关性研究进展[J];国外医学.外科学分册;2005年03期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 于永利;;抗乳腺癌免疫治疗融合蛋白[A];中国免疫学会第四届学术大会会议议程及论文摘要集[C];2002年

2 郭红飞;;中医治疗乳腺癌的策略[A];江西省中医、中西医结合肿瘤学术交流会论文集[C];2012年

3 庞朋沙;伍会健;;乳腺癌治疗靶标的研究进展[A];北方遗传资源的保护与利用研讨会论文汇编[C];2010年

4 陆劲松;邵志敏;吴炅;韩企夏;沈镇宙;;新型维甲酸抑制乳腺癌细胞的生长及诱导凋亡的机制研究[A];2000全国肿瘤学术大会论文集[C];2000年

5 刘爱国;胡冰;;乳腺癌临床治疗进展[A];安徽省抗癌协会第四次代表大会暨乳腺癌、肺癌专业委员会成立会议、安徽省肿瘤防治进展学术研讨会论文汇编[C];2001年

6 张嘉庆;王殊;乔新民;;乳腺癌的现状和远景[A];第一届全国中西医结合乳腺疾病学术会议论文汇编[C];2002年

7 刘清俊;;乳腺癌综合治疗的新进展[A];山西省抗癌协会第六届肿瘤学术交流会论文汇编[C];2003年

8 邵志敏;;21世纪乳腺癌治疗的展望[A];第三届中国肿瘤学术大会教育论文集[C];2004年

9 陈松旺;张明;;乳腺癌治疗的回顾与展望[A];西部地区肿瘤学学术会议论文汇编[C];2004年

10 白霞;傅建新;丁凯阳;王兆钺;阮长耿;;组织因子途径抑制物-2在乳腺癌细胞中的表达研究[A];第10届全国实验血液学会议论文摘要汇编[C];2005年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 ;血检有望揭示乳腺癌治疗效果[N];医药经济报;2004年

2 记者 郑晓春;乳腺癌细胞扩散基因被找到[N];科技日报;2007年

3 中国军事医学科学院肿瘤中心主任 宋三泰;乳腺癌有了新疗法[N];中国妇女报;2002年

4 王艳红;抑制ＤＮＡ修补可消灭乳腺癌细胞[N];医药经济报;2005年

5 詹建;乳腺癌饮食 两个时期不一样[N];中国中医药报;2006年

6 辛君;乳腺癌扩散基因“浮出水面”[N];大众卫生报;2009年

7 记者 毛黎;美发现有效抑制乳腺癌细胞生长的分子[N];科技日报;2010年

8 记者 吴春燕　通讯员 王丽霞;乳腺癌治疗将有新途径[N];光明日报;2011年

9 王乐　沈基飞;我科学家发现导致乳腺癌耐药的新标志物[N];科技日报;2011年

10 刘霞;一种天然分子能阻止乳腺癌恶化[N];科技日报;2011年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 柴红燕;疾病状态下CYP4Z1和4A的生物学行为及其药物干预研究[D];武汉大学;2012年

2 李凯;ID(inhibitor of DNA binding)家族蛋白调控乳腺细胞的分化并影响乳腺癌的预后[D];复旦大学;2014年

3 江一舟;乳腺癌新辅助化疗前后基因变异检测及其功能论证[D];复旦大学;2014年

4 马邵;酪氨酸去磷酸化增强表皮生长因子受体在乳腺癌治疗中靶向性的研究[D];山东大学;2015年

5 姚若斯;精氨酸甲基转移酶PRMT7诱导乳腺癌细胞发生表皮—间质转换及转移的作用机制研究[D];东北师范大学;2015年

6 侯培锋;α-酮戊二酸二甲酯(DM-2KG)上调缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)诱发高致瘤性干细胞样乳腺癌细胞机制研究[D];福建医科大学;2014年

7 李丽丽;分泌蛋白SHON调控乳腺癌细胞EMT的分子机制研究[D];东北师范大学;2015年

8 陈丽艳;PI3K抑制剂联合组蛋白去乙酰化酶抑制剂对乳腺癌协同杀伤作用的分子机制研究[D];延边大学;2015年

9 朴俊杰;乳腺癌差异基因筛选及PAIP1对其生物学行为的影响[D];延边大学;2015年

10 汪[?如;染色体6q25.1区域基因多态性与乳腺癌遗传易感性的关联研究[D];南方医科大学;2015年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 杜文英;乳腺癌分子亚型的临床与病理特点[D];郑州大学;2011年

2 贾晓菲;彩色多普勒超声与乳腺癌病理及免疫组化指标的相关性研究[D];内蒙古大学;2015年

3 靳文;乳腺癌全基因组DNA甲基化修饰的研究[D];内蒙古大学;2015年

4 吴坤琳;TLR4/MyD88信号通路对乳腺癌侵袭性影响的实验研究[D];福建医科大学;2015年

5 葛广哲;树，

本文编号：1117452