TTF1-NP诱导人肝癌HepG-2细胞自噬的实验研究

发布时间：2017-10-31 21:33

  本文关键词：TTF1-NP诱导人肝癌HepG-2细胞自噬的实验研究

  更多相关文章： TTF1-NP HepG-2 细胞自噬 PI3K/Akt/mTOR JNK

【摘要】：目的 探讨5,2',4'-三羟基-6,7,5'-三甲氧基黄酮(TTF1-NP)对人肝癌HepG-2自噬的影响及其相关的作用机制方法通过MTT法检测不同浓度(15-240μM)的TTF1-NP作用不同时间(12 h,24 h,48h)后对HepG-2细胞存活率的影响；利用透射电子显微镜(transmission electron microscope, TEM)观察细胞中自噬体的形成；Western Blot检测TTF1-NP在不同浓度和不同时间下作用HepG-2细胞后自噬标志蛋白LC3-Ⅱ、Beclin-1的表达,及PI3K/Akt/mTOR通路中Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR和MAPK/JNK通路中p-JNK的蛋白表达情况。结果1.MTT法细胞活力检测：TTF1-NP能够降低HepG-2细胞的存活率,并且随着药物浓度和作用时间的增加,抑制增殖作用越明显,且呈现一定的浓度-时间依赖性,差异具有统计学意义。2.透射电子显微镜检测：TTF1-NP作用后,HepG-2细胞中有典型双层膜结构的自噬体及单层膜的自噬溶酶体出现,提示TTF1-NP诱导HepG-2细胞自噬的产生。3.自噬标志蛋白检测：利用Western Blot对LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白检测得出,对照组中,两种蛋白表达水平较低,随着药物浓度及作用时间的增加,LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白表达水平逐渐增加,自噬水平升高。4. PI3K/Akt/mTOR通路蛋白检测：Western Blot检测结果显示,对照组细胞p-Akt, p-mTOR表达水平较高,随着TTF1-NP药物浓度和作用时间增加,二者的表达逐渐降低；加入PI3K/Akt/mTOR通路激动剂insulin后,与对照组相比,insulin+对照组中的p-Akt, p-mTOR表达升高(P0.05); TTF1-NP+insulin组中p-Akt, p-mTOR较TTF1-NP组表达升高(P0.01), LC3-Ⅱ表达降低(P＜0.01),差异具有统计学意义。5. MAPK/JNK通路蛋白检测：Western Blot检测发现,p-JNK随着TTF1-NP药物浓度和作用时间的增加表达逐渐升高。加入JNK抑制剂SP600125后,TTF1-NP+SP600125组中的p-JNK, LC3-Ⅱ的蛋白水平较TTF1-NP组降低,差异显著,而与对照组相比,二组中的两蛋白显著升高(P0.01)。结论TTF1-NP可以诱导人肝癌HepG-2自噬。TTF1-NP诱导人肝癌HepG-2细胞自噬的作用机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路及激活MAPK/JNK信号通路有关。
【关键词】：TTF1-NP HepG-2 细胞自噬 PI3K/Akt/mTOR JNK
【学位授予单位】：延边大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 中英文缩略词9-12
• 第一章 引言12-16
• 第二章 材料16-18
• 2.1 实验细胞16
• 2.2 实验药物16
• 2.3 实验试剂16-17
• 2.4 实验仪器17-18
• 第三章 方法18-24
• 3.1 细胞培养18
• 3.2 MTT法检测细胞活力18
• 3.3 透射电子显微镜形态学观察细胞自噬18-20
• 3.4 Western Blot法检测蛋白表达20-22
• 3.5 数据处理与分析22-24
• 第四章 结果24-30
• 4.1 MTT法对细胞存活率检测结果24
• 4.2 透射电子显微镜对自噬的形态学检测结果24-25
• 4.3 Western Blot对自噬标志蛋白检测结果25-26
• 4.4 TTF1-NP诱导HepG-2细胞自噬的作用机制26-30
• 第五章 讨论30-35
• 第六章 结论35-36
• 参考文献36-41
• 致谢41

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本文编号：1123887