羽扇豆醇对人肝癌细胞系SMMC-7721中肝癌干细胞样细胞生物学行为的影响

发布时间：2017-10-31 23:24

  本文关键词：羽扇豆醇对人肝癌细胞系SMMC-7721中肝癌干细胞样细胞生物学行为的影响

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【摘要】：目的:体外探讨羽扇豆醇对人肝癌细胞系SMMC-7721中肝癌干细胞样细胞生物学行为的影响。方法:1收集采用普通培养基贴壁培养的肝癌细胞,然后使用无血清培养基悬浮培养得到所需人肝癌细胞株SMMC-7721干细胞样细胞。2使用流式细胞仪检测不同浓度羽扇豆醇(0、20、40、60μmol/L)作用下人肝癌细胞株SMMC-7721干细胞样细胞的细胞凋亡率和细胞周期的分布。3使用不同浓度羽扇豆醇(0、20、40、60μmol/L)作用于人肝癌细胞株SMMC-7721干细胞样细胞,分别于24h、48h、72h,用MTS法检测羽扇豆醇对SMMC-7721干细胞样细胞增殖的影响。4使用不同浓度羽扇豆醇(0、20、40、60μmol/L)作用于人肝癌细胞株SMMC-7721干细胞样细胞,使用Transwell小室,于24h观察羽扇豆醇对SMMC-7721干细胞样细胞侵袭、迁移能力的影响。5将SMMC-7721干细胞样细胞置于含不同浓度羽扇豆醇(0、20、40、60μmol/L)的悬浮培养基中,于5-7天观察羽扇豆醇对SMMC-7721干细胞样细胞成球能力的影响。6将SMMC-7721干细胞样细胞置于含不同浓度羽扇豆醇(0、20、40、60μmol/L)的无血清培养基中,分别于20min、40min、60min时观察羽扇豆醇对SMMC-7721干细胞样细胞的细胞-基质粘附性的影响。结果:1.肝癌干细胞样细胞的凋亡和细胞周期的流式检测结果FCM结果显示羽扇豆醇作用于SMMC-7721肝癌干细胞样细胞48小时后,0、20、40、60μmol/L浓度组,细胞凋亡率分别为2.24±0.42%、16.27±2.4%、3.96±2.42%、27.37±1.93%,用药组与对照组比较凋亡率增加(P0.05)。细胞周期结果显示羽扇豆醇作用于SMMC-7721肝癌干细胞样细胞48h后,细胞周期的分布与药物浓度无明显相关,G0/G1期变化不明显,0、20、40、60μmol/L浓度组分别为36.78±0.68、36.36±0.86、36.52±0.70、36.66±0.38,用药组与对照组比较差异无统计学意义(P0.05);S期变化不明显,0、20、40、60μmol/L浓度组分别为27.58±1.81、27.82±1.33、27.50±0.90、28±0.32,用药组与对照组比较差异无统计学意义(P0.05);G2/M期无明显变化,0、20、40、60μmol/L浓度组分别为35.26±1.27、35.42±0.93、35.58±0.89、35.34±0.35,用药组与对照组比较差异无统计学意义(P0.05)。2.不同浓度羽扇豆醇处理后细胞增殖能力比较MTS结果显示在浓度为20、40、60μmol/L的羽扇豆醇作用24h后,SMMC-7721肝癌干细胞样细胞抑制率分别为12.05%、23.37%、30.46%,用药组与对照组比较差异有统计学意义(P0.05);48h后细胞抑制率分别为17.09%、26.74%、35.08%,用药组与对照组比较差异有统计学意义(P0.05);72h后细胞抑制率分别为22.13%、33.23%、44.83%,用药组与对照组比较差异有统计学意义(P0.05);同一浓度不同时间比较,随时间延长,抑制率增加,三组比较差异有统计学意义(P0.05)。3.不同浓度羽扇豆醇处理后细胞侵袭能力比较显微镜观察结果显示羽扇豆醇作用于SMMC-7721肝癌干细胞样细胞24小时后,20、40、60μmol/L浓度组,细胞侵袭抑制率分别为22.48%、27.54%、41.00%,用药组与对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。4.不同浓度羽扇豆醇处理后细胞迁移能力比较显微镜观察结果显示羽扇豆醇作用于SMMC-7721肝癌干细胞样细胞24小时后,20、40、60μmol/L浓度组,细胞迁移抑制率分别为18.81%、31.93%、45.05%,用药组与对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。5.不同浓度羽扇豆醇处理后细胞成球数量比较显微镜观察结果显示羽扇豆醇作用于SMMC-7721肝癌干细胞样细胞5-7天后,20、40、60μmol/L浓度组,细胞成球抑制率分别为27.03%、36.49%、58.11%,用药组与对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。6.不同浓度羽扇豆醇处理后的细胞-基质粘附性比较显微镜观察结果结果显示浓度为20、40、60μmol/L的羽扇豆醇作用20min后,SMMC-7721肝癌干细胞样细胞粘附抑制率分别为5.07%、20.96%、40.96%,用药组与对照组比较差异有统计学意义(P0.05);40min后粘附抑制率分别为6.53%、27.50%、40.17%,用药组与对照组比较差异有统计学意义(P0.05);60min后粘附抑制率分别为16.85%、29.15%、46.94%,用药组与对照组比较差异有统计学意义(P0.05);同一浓度不同时间比较,随时间延长,抑制率增加,三组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:1.羽扇豆醇对SMMC-7721肝癌干细胞样细胞具有促凋亡作用,促凋亡作用具有浓度依赖性。但其对SMMC-7721肝癌干细胞样细胞的细胞周期无明显影响。2.羽扇豆醇对SMMC-7721肝癌干细胞样细胞的生长具有抑制作用,抑制作用具有浓度依赖性和时间依赖性。3.羽扇豆醇对SMMC-7721肝癌干细胞样细胞的侵袭能力具有抑制作用,抑制作用具有浓度依赖性。同时对SMMC-7721肝癌干细胞样细胞的迁移能力具有抑制作用,抑制作用具有浓度依赖性。4.羽扇豆醇对SMMC-7721肝癌干细胞样细胞的成球能力具有抑制作用,抑制作用具有浓度依赖性。5.羽扇豆醇对SMMC-7721肝癌干细胞样细胞的粘附能力具有抑制作用,抑制作用具有浓度依赖性和时间依赖性。
【关键词】：肝癌干细胞样细胞 羽扇豆醇 SMMC-7721 凋亡 侵袭 迁移 粘附
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-11
• 英文缩写11-12
• 前言12-13
• 材料与方法13-18
• 结果18-20
• 附图20-25
• 附表25-28
• 讨论28-34
• 结论34-35
• 参考文献35-38
• 综述 原发性肝癌干细胞及羽扇豆醇研究进展38-60
• 参考文献52-60
• 致谢60-61
• 个人简历61

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本文编号：1124240