miR-30a通过下调Runx2抑制人骨肉瘤细胞的迁移，侵袭和增殖

发布时间：2017-11-01 13:19

  本文关键词：miR-30a通过下调Runx2抑制人骨肉瘤细胞的迁移，侵袭和增殖

  更多相关文章： 骨肉瘤 miR-30a Runx2

【摘要】：目的：本文旨在研究miR-30a在恶性程度不同的几株的骨肉瘤细胞和骨髓基质细胞的内源性表达情况。探讨miR-30a对骨肉瘤细胞的迁移、侵袭和增殖的影响,并对其机制进行初步探索。方法：定量PCR检测miR-30a在恶性程度不同的几株骨肉瘤细胞(143B, MG63, U2OS, Saos2)和正常骨髓基质细胞(HS-5)中的表达。过表达或抑制miR-30a分别处理人骨肉瘤细胞143B和Saos2。Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力；划痕实验观察细胞划痕愈合能力；MTT实验和流式细胞术检测miR-30a对骨肉瘤细胞增殖的影响；利用qRT-PCR和Western blot分别在mRNA水平、蛋白水平寻找miR-30a的靶基因。利用pMIR-REPORT质粒构建miR-30a靶基因3'-UTR荧光素酶报告质粒,双荧光素酶报告基因实验检测miR-30a是否会结合靶基因Runx23'-UTR。结果：在几株骨肉瘤细胞和正常骨髓基质细胞中,miR-30a在恶性程度最高的143B细胞中表达最低,在恶性程度较低的Saos2细胞和骨髓基质细胞中表达最高。过表达miR-30a可以抑制骨肉瘤细胞143B迁移和侵袭(P0.05),MTT实验显示,miR-30a明显抑制143B细胞的活力(P0.01),流式细胞术显示143B细胞被阻滞在G1期；在Saos2细胞中抑制miR-30a的内源性表达后,Saos2细胞的迁移和侵袭能力增加(P0.05),细胞增殖能力也表现出上升水平(P0.05)。同时,过表达miR-30a可以抑制143B细胞中Runx2的蛋白表达。抑制内源性miR-30a后,Saos2细胞中的Runx2蛋白水平表达明显增加(P0.05),而不论过表达或抑制miR-30a Runx2的mRNA水平均没有明显变化。成功构建Runx2 3'-UTR荧光素酶质粒。双荧光素酶活性实验显示,加入miR-30a后,第一个荧光素片段载体荧光素活性降低(P0.01)。Rescue试验中,同时过表达miR-30a和Runx2,143B细胞划痕愈合率得到恢复(P0.05),细胞活力也上升(P0.01)；同时抑制miR-30a和Runx2,Saos2细胞划痕愈合率(P0.05)和细胞活力都下降(P0.01)。结论：miR-30a在恶性程度不同的骨肉瘤细胞中内内源性表达水平有明显差异。恶性程度高的细胞中miR-30a的表达水平比恶性程度低的细胞和正常骨髓基质细胞明显降低。miR-30a可以抑制骨肉瘤细胞的迁移、侵袭和增殖,其作用可以能是通过抑制Runx2的表达来实现。
【关键词】：骨肉瘤 miR-30a Runx2
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R738.1
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 前言11-12
• 1 材料12-15
• 2 实验方法15-25
• 3 结果25-36
• 4 讨论36-38
• 参考文献38-42
• 全文总结42-43
• 文献综述43-48
• 参考文献45-48
• 致谢48-49
• 攻读学位期间发表的学术论文49

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本文编号：1126999