LPS诱导人胃癌细胞上皮间质转化的作用及机制

发布时间：2017-11-03 08:24

  本文关键词：LPS诱导人胃癌细胞上皮间质转化的作用及机制

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【摘要】：目的探讨LPS诱导人胃癌细胞上皮间质转化的作用及机制,为胃癌治疗提供新思路。方法LPS作用于人胃癌细胞,显微镜下观察细胞形态变化、Western blot和Real-time PCR技术检测EMT相关分子的表达、划痕-愈合实验和Transwell侵袭实验检测细胞的迁移和侵袭能力。Western blot和Real-time PCR技术检测LPS诱导前后Shh信号通路相关分子(Shh、Ptch1、Gli2)的表达水平;采用Shh信号通路特异性抑制剂环巴胺联合LPS作用于人胃癌细胞,观察抑制Shh信号通路对LPS诱导人胃癌细胞EMT、迁移和侵袭能力的影响。利用NF-κB信号通路特异性抑制剂BAY11-7028,观察抑制NF-κB信号通路对LPS诱导Shh信号通路活化的影响,以确定LPS是否通过NF-κB信号通路调控Shh信号通路。结果10μg/m L LPS作用于人胃癌细胞AGS、HGC-27和SGC-7901 48 h后,AGS细胞形态由鹅卵石样变为长梭形,HGC-27和SGC-7901细胞形态无明显改变;Real-time PCR结果显示,10μg/m L LPS作用于人胃癌细胞AGS、HGC-27和SGC-7901 48 h后,三株人胃癌细胞的上皮细胞标记物E-cadherin m RNA表达较对照组降低,间质细胞标记物N-cadherin m RNA表达较对照组升高,差异无统计学意义(P0.05);Western blot结果显示10μg/m L LPS作用于人胃癌细胞AGS、HGC-27和SGC-7901 48 h后,三株人胃癌细胞的上皮细胞标记物E-cadherin蛋白表达较对照组显著升高,间质细胞标记物N-cadherin蛋白表达较对照组显著降低,差异有统计学意义(P0.05);划痕-愈合实验和Transwell侵袭实验结果显示,10μg/m L LPS作用于人胃癌细胞AGS、HGC-27和SGC-7901 48 h后,三株人胃癌细胞的迁移和侵袭能力较对照组显著增强,差异有统计学意义(P0.05)。10μg/m L LPS作用于人胃癌细胞AGS、HGC-27和SGC-790148 h后,Shh信号通路相关分子Shh、Gli2、Ptch1 m RNA和蛋白表达水平较对照组显著升高,差异均有统计学意义。10μM环巴胺和10μg/m L LPS联合作用于人胃癌细胞AGS、HGC-27和SGC-7901 48 h后,三株人胃癌细胞Shh信号通路相关分子Shh、Gli2、Ptch1 m RNA和蛋白表达水平较LPS组显著降低,差异均有统计学意义(P0.05);三株人胃癌细胞上皮细胞标记物E-cadherin蛋白表达较LPS组显著升高,间质细胞标记物N-cadherin、Slug和Vimentin蛋白表达较LPS组显著降低,差异有统计学意义(P0.05);三株人胃癌细胞的迁移和侵袭能力较LPS组亦显著降低,差异均有统计学意义(P0.05)。10μg/m L LPS作用于人胃癌细胞SGC-7901 48 h后,NF-κB p65蛋白表达较对照组显著升高,IκBα蛋白表达显著降低,差异均有统计学意义(P0.05)。10μM BAY11-7028和10μg/m L LPS联合作用于人胃癌细胞SGC-7901 48 h后,Shh信号通路相关分子Shh、Gli2、Ptch1的m RNA和蛋白表达水平较LPS组显著降低,差异均有统计学意义(P0.05)。结论LPS可以诱导人胃癌细胞发生EMT,促进人胃癌细胞的迁移和侵袭。LPS诱导人胃癌细胞发生EMT的机制可能与激活NF-κB/Shh信号通路有关。
【关键词】：胃癌 上皮间质转化 脂多糖 Sonic Hedgehog NF-κB
【学位授予单位】：广东药学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.2
【目录】：

• 摘要6-8
• Abstract8-10
• 前言10-16
• 第一部分 LPS诱导人胃癌细胞EMT16-35
• 1 实验材料16-20
• 1.1 细胞系16
• 1.2 主要试剂16-18
• 1.3 主要仪器18
• 1.4 主要试剂配制18-20
• 2 实验方法20-27
• 2.1 细胞培养20-21
• 2.2 细胞形态学观察21
• 2.3 划痕-愈合实验21
• 2.4 Transwell侵袭实验21-22
• 2.5 MTS法检测LPS对人胃癌细胞增殖的影响22
• 2.6 实时荧光定量PCR22-24
• 2.7 Western blot检测蛋白的表达24-27
• 2.8 统计学分析27
• 3 结果27-32
• 3.1 LPS诱导人胃癌细胞发生形态学改变27-28
• 3.2 LPS诱导E-cadherin和N-cadherin表达变化28-29
• 3.3 LPS促进人胃癌细胞迁移29-32
• 3.4 LPS促进人胃癌细胞侵袭32
• 4 讨论32-35
• 第二部分 Shh信号通路介导LPS诱导的人胃癌细胞EMT35-45
• 1 实验材料35-36
• 1.1 细胞系35
• 1.2 主要试剂35-36
• 1.3 主要仪器36
• 1.4 主要试剂配制36
• 2 实验方法36-37
• 2.1 细胞培养36
• 2.2 实时荧光定量PCR36
• 2.3 Western blot法检测蛋白的表达36
• 2.4 划痕-愈合实验36
• 2.5 Transwell侵袭实验36
• 2.6 统计学分析36-37
• 3 结果37-42
• 3.1 LPS激活人胃癌细胞Shh信号通路37-38
• 3.2 Cyclopamine抑制LPS激活Shh信号通路38-40
• 3.3 Cyclopamine对EMT标志分子表达的影响40-41
• 3.4 Cyclopamine抑制LPS诱导的人胃癌细胞迁移增强41-42
• 3.5 Cyclopamine抑制LPS诱导的人胃癌细胞侵袭增强42
• 4 讨论42-45
• 第三部分 NF-kB信号通路在LPS诱导人胃癌细胞Shh信号活化中的作用45-50
• 1 实验材料45-46
• 1.1 细胞系45
• 1.2 主要试剂45-46
• 1.3 主要仪器46
• 2 实验方法46
• 2.1 细胞培养46
• 2.2 实时荧光定量PCR46
• 2.3 Western blot法检测蛋白的表达46
• 2.4 统计学分析46
• 3 结果46-49
• 3.1 LPS激活人胃癌细胞NF-κB信号通路46-47
• 3.2 LPS通过NF-KB信号通路激活人胃癌细胞Shh信号通路47-49
• 4 讨论49-50
• 参考文献50-54
• 附录一 英文缩写词表54-55
• 附录二 攻读学位期间发表的论文专利及参加科研情况55-56
• 致谢56

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 曹景利;朱学良;;上皮细胞极性的建立和维持[J];中国细胞生物学学报;2010年02期

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 吴茜子;Hedgehog信号通路促进卵巢癌上皮间质化[D];华中科技大学;2012年

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本文编号：1135398