DADS与RORα激动剂对人胃癌细胞EMT与迁移侵袭的作用

发布时间：2017-11-03 19:00

  本文关键词：DADS与RORα激动剂对人胃癌细胞EMT与迁移侵袭的作用

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【摘要】：[目的]本研究在前期工作的基础上,与RORα激动剂SR1078比较,进一步探讨二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)上调RORα对人胃癌MGC803细胞EMT与迁移侵袭的作用及其分子机制,是否具有RORα激动剂的作用。[方法]分别用DADS、RORα激动剂SR1078、RORα抑制剂T0901317处理MGC803细胞,倒置相差显微镜观察各处理组MGC803细胞形态变化。MTT法、迁移实验和侵袭实验检测各实验组MGC803细胞增殖、迁移与侵袭的能力;Western blot检测各实验组MGC803细胞总蛋白中RORα、β-catenin、Rac1、TGF-β1、Vimentin与E-cadherin蛋白表达,检测MGC803细胞核中β-catenin蛋白的表达;免疫荧光检测RORα,β-catenin、Rac1、TGF-β1、Vimentin与E-cadherin蛋白的表达与定位;免疫共沉淀检测RORα与β-catenin结合情况。[结果]相差显微镜检测结果显示,对照组细胞多呈梭形而圆形较少;T0901317组长梭形细胞更多而圆形细胞更少,T0901317+DADS组较T0901317组圆形细胞增多,梭形减少;DADS组与SR1078组细胞大部分呈圆形,梭形细胞明显减少,而SR1078+DADS组细胞基本呈圆形,较DADS组与SR1078组梭形细胞更为少见。MTT比色法、迁移实验和侵袭实验结果显示,SR1078组和DADS组较对照组细胞的增殖与迁移侵袭能力显著抑制(P0.05);T0901317较对照组细胞的增殖与迁移侵袭能力明显增强(P0.05),而T0901317+DADS组细胞的增殖与迁移侵袭能力较T0901317组明显下降(P0.05)。Western blot结果显示,DADS组和SR1078组较对照组RORα与E-cadherin显著上调和Rac1、TGF-β1与Vimentin显著下调(P0.05);T0901317组较对照组RORα与E-cadherin显著下调和TGF-β1、Rac1与Vimentin显著上调(P0.05),而T0901317+DADS组RORα与E-cadherin表达较T0901317组上调和Rac1、TGF-β1与Vimentin下降(P0.05)。在总蛋白中,各组β-catenin蛋白表达无显著差异(P0.05),但DADS与SR1078能显著抑制核内β-catenin表达(P0.05),T0901317明显增强核内β-catenin表达(P0.05),而T0901317+DADS组核内β-catenin较T0901317下调(P0.05)。免疫荧光结果显示,SR1078组和DADS组的RORα和E-cadherin蛋白阳性染色较对照组增强,TGF-β1、Rac1与Vimentin阳性较对照组减弱,T0901317组以上五种蛋白免疫荧光结果与DADS和SR1078的结果相反,而DADS处理T0901317组细胞后,RORα和E-cadherin蛋白阳性较T0901317组阳性增加,TGF-β1、Rac1与Vimentin阳性较T0901317组阳性降低。免疫共沉淀结果显示,DADS和SR1078能够促进RORα与β-catenin结合,T0901317可抑制这两种蛋白的结合,而T0901317+DADS组RORα与β-catenin结合明显增加。[结论]1.DADS可上调RORα通过Wnt/β-catenin通路抑制MGC803细胞EMT与迁移侵袭。2.RORα激动剂可增强DADS对MGC803细胞EMT与迁移侵袭的作用。3.DADS具有RORα激动剂的作用。
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.2

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