染料木黄酮与内源性雌二醇对人乳腺癌细胞双向生物学作用及其分子机制初步研究

发布时间：2017-11-04 08:11

  本文关键词：染料木黄酮与内源性雌二醇对人乳腺癌细胞双向生物学作用及其分子机制初步研究

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【摘要】：目的 乳腺癌是妇女最常见的恶性肿瘤之一,严重威胁着女性人群的健康。染料木黄酮是大豆异黄酮家族的主要抗癌因子之一,其作为类雌激素与人体内源性激素对女性乳腺癌的共同影响是决定其防控乳腺癌作用效果的关键点。流行病学及体外实验表明具有防治乳腺癌的作用,且人体不同时期其防治效果不同,在青春期就开始食用豆制品,可抑制乳腺癌的发生,绝经期前大豆异黄酮摄入量与乳腺癌发病风险呈明显的负相关,但在绝经后则有可能会刺激乳腺癌的增长,表明内源性雌激素水平不同其防治效果不同。现有报导均以染料木黄酮单体来研究对乳腺癌细胞的作用,而忽略人体内内源性雌激素与其的交互作用,得出不同甚至相反的结果,此外,雌激素受体类型不同,染料木黄酮生物学效应存在较大差别。对大豆异黄酮和乳腺癌关系的争论显得更加尖锐,缺乏强有力的、足以达成共性的支持证据。本研究将染料木黄酮、内源性雌激素与不同雌激素受体类型三者有机结合,选用乳腺癌细胞MDA-MB-231 (ERβ)和乳腺癌细胞T47D (ERa+ERβ),探索在不同雌二醇水平下(绝经前和绝经后)染料木黄酮对其增殖的抑制作用,进而检测不同雌二醇水平下染料木黄酮作用后两株乳腺癌细胞周期、细胞凋亡所受的影响,以全基因组表达谱芯片作为一种高通量的基因表达分析工具,获取不同处理方式下差异表达基因谱,并验证。方法 在MTT实验中雌二醇设计Opmol/L、80pmol/L、800pmol/L 1000pmol/L、1600pmol/L共5个水平,每个雌二醇水平对应设计染料木黄酮浓度为Oμmol/L、5μmol/L、20μmol/L、40μmol/L共5个水平,用含相应受试物的培养基分别培养乳腺癌细胞MDA-MB-231(ERβ)和乳腺癌细胞T47D (ERa+ERβ)各96小时后,经MTT法检测细胞吸光度值,并计算细胞增殖抑制率。染料木黄酮浓度为20μmol/L时,应用流式细胞术探讨不同雌二醇水平(Opmol/L、80pmol/L、800pmol/L)对两株细胞周期、细胞凋亡影响的差异。染料木黄酮浓度为20μmol/L,不同雌二醇水平(Opmol/L、80pmol/L、00pmol/L)下,采用Agilent单标表达谱基因芯片对差异表达基因进行了筛选并应用实时荧光定量PCR技术随机选择差异基因EGFR验证基因芯片结果的可靠性。结果 MTT实验结果显示,雌二醇水平为Opmol/L和80pmol/L时,染料木黄酮抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231 (ERp)增殖的有效剂量为20μmol/L;雌二醇为800pmol/L时,10 μmol/L染料木黄酮可显著抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231 (ERp)增殖；雌二醇水平为Opmol/L时,染料木黄酮浓度在10pmol/L即可发挥对乳腺癌细胞T47D (ERa+ERβ)增殖明显的抑制作用,而当雌二醇水平为80pmol/L和800pmol/L时,染料木黄酮抑制乳腺癌细胞T47D(ERa+ERp)增殖作用的浓度较高为20μmol/L。各雌二醇水平下,染料木黄酮在20『mol/L时使乳腺癌细胞MDA-MB-231(ERβ)细胞周期阻滞在G0/G1期和S期；使乳腺癌细胞T47D (ERa+ERβ)细胞周期阻滞在G2/M期。在染料木黄酮浓度为20μmol/L时,不同雌二醇水平下,同空白对照组比较,乳腺癌细胞MDA-MB-231 (ERp)凋亡率增强；对乳腺癌细胞T47D(ERa+ERβ),染料木黄酮浓度20μmol/L,雌二醇水平为80pmol/L时细胞凋亡率高于雌二醇水平为800pmol/L时,说明雌二醇在妇女绝经后水平时,染料木黄酮诱导乳腺癌细胞T47D (ERa+ERβ)凋亡的作用大于雌二醇在妇女绝经前水平。选取的乳腺癌细胞MDA-MB-231 (ERβ)组用基因表达谱芯片筛选出差异表达基因49个,其中上调表达的基因有35个,下调表达的基因有14个。通过功能分类对差异基因的功能进行分析发现：其中生物过程与分子功能占了绝大部分。选取的乳腺癌细胞T47D (ERa+ERβ)组用基因表达谱芯片筛选出差异表达基因84个,其中上调表达的基因有69个,下调表达的基因有15个。通过功能分类对差异基因的功能进行分析发现：其中生物过程与细胞组分占了绝大部分。以ACTB为内参基因,我们利用RT-qPCR技术对随机选取的两组乳腺癌细胞共有的上调差异基因EGFR对基因芯片结果进行了验证,验证的结果与基因芯片筛选的结果一致。结论 染料木黄酮对乳腺癌细胞MDA-MB-231 (ERβ)和乳腺癌细胞T47D (ERa+ERβ)增殖的抑制作用、细胞周期阻滞、细胞凋亡情况、差异表达基因EGFR表达的影响会因雌二醇水平的不同和雌激素受体的不同而有所差异,但其具体作用机制还有待更进一步研究。
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.9

【参考文献】

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本文编号：1138553