乳杆菌菌株抑制结肠癌腺细胞HT-29细胞增殖的菌体功能分子研究

发布时间：2017-11-04 08:02

  本文关键词：乳杆菌菌株抑制结肠癌腺细胞HT-29细胞增殖的菌体功能分子研究

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【摘要】：结肠癌是当今对人类健康具有严重危害的一种癌症。大量数据表明饮食中导致肿瘤细胞的产生主要是大量摄取高脂肪、高能量类的食物。而经常摄取益生菌对于预防和缓解结肠癌症状具有潜在的价值。本文以8株植物乳杆菌的胞外多糖(exopolysaccharides,EPS)、表面蛋白(S-layer protein,S层蛋白)以及热灭活菌体为对象,研究其抑制结肠癌细胞HT-29增殖的效果。首先提取乳杆菌胞外多糖和表面蛋白,并制备热灭活菌体。采用MTS法评价菌体表面蛋白、胞外多糖及热灭活菌体对结肠癌细胞HT-29体外增殖的抑制作用;通过流式细胞仪研究乳杆菌胞外多糖和表面蛋白诱导细胞凋亡情况;并研究植物乳杆菌的胞外多糖和表面蛋白的抗氧化作用,即对DPPH自由基、羟基自由基(OH·)以及超氧阴离子自由基(O2-·)的清除作用;最后对所得的优良菌株耐酸耐胆盐的能力进行研究。研究结果如下:1.所研究的8株乳杆菌,产胞外多糖的能力各不相同。其中3号菌株最高,其浓度可达到6.36 mg/mL,最低的是14号菌株,浓度为3.95 mg/m L;不同菌株产表面蛋白的能力也存在差异,其中3号菌株产表面蛋白含量最高,其浓度可达到49.25 mg/mL,最低的是9号菌株,获得表面蛋白浓度为2.06 mg/mL。2.乳杆菌胞外多糖、表面蛋白和热灭活菌体均可不同程度的抑制结肠癌细胞HT-29增殖,各菌株之间差异显著(p0.05)。在胞外多糖浓度为250μg/m L时,3号菌和31号菌抑制结肠癌腺体细胞HT-29增殖显著高于其他菌株(p0.05),3号菌抑制率为14.28%;3号菌株表面蛋白浓度在500μg/mL时对HT-29细胞增殖抑制率为30.76%,显著高于(p0.05)LGG的抑制率10.30%;13和31号菌株热灭活菌体浓度为108 cfu/mL时,抑制结肠癌腺体细胞HT-29增殖显著高于(p0.05)其它菌株,13号菌抑制率为14.11%;流式细胞分析发现,3号菌表面蛋白浓度为500μg/m L时,可以诱导结肠癌细胞凋亡,其凋亡率为84.86%,3号菌胞外多糖浓度为500μg/m L时,可以诱导结肠癌细胞凋亡,其凋亡率为75.78%。3.3和13号菌胞外多糖浓度为500μg/m L时,对DPPH的清除率显著高于(p0.05)其它菌株和LGG,3号菌对DPPH的清除率为30.82%;3号菌表面蛋白对DPPH的清除率8.54%,显著高于(p0.05)其它菌株;13号菌胞外多糖浓度为500μg/mL时,对O2-·清除率为59.44%,显著高于(p0.05)其它菌株;3号菌表面蛋白对O2-·清除率为13.34%,显著高于(p0.05)其它菌株;3号菌胞外多糖浓度为500μg/m L时对OH·清除率为39.2%,显著高于(p0.05)其他菌株和LGG,3号菌表面蛋白对OH·清除率为13.01%,显著高于(p0.05)其它菌株和LGG。4.3号菌在pH 3.0条件下培养18 h后,活菌存活数较少,在pH 2.0条件下培养18 h后无法存活。在胆盐浓度为0.4%作用18 h后,仍有较多的活菌数,3号菌的耐酸耐胆盐能力和LGG相近,说明3号菌具有较好的耐酸耐胆盐能力。从上述结果可以得出:通过实验发现3号菌Lactobacillus plantarum 3的表面蛋白和胞外多糖可以抑制结肠癌细胞HT-29增殖,具有清除活性氧的功能;3号菌株具有较好的耐酸耐胆盐能力,是一株具有潜在益生功能的菌株。
【学位授予单位】：大连工业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.35

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本文编号：1138513