微泡在乳腺癌耐药信息传递及与化疗疗效判断中的价值

发布时间：2017-11-04 09:23

  本文关键词：微泡在乳腺癌耐药信息传递及与化疗疗效判断中的价值

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【摘要】：[目的]探讨微泡在乳腺癌细胞间耐药信息的传递及其携带耐药相关蛋白MRP1、BCRP水平与化疗疗效判断中的价值。[方法]1、选用乳腺癌细胞MCF-7/WT与耐多柔比星细胞MCF-7/ADM为模型,运用MTT法检测两株细胞对药物多柔比星的IC50,激光共聚焦显微镜观察多柔比星在两株细胞内的分布,透射电子显微镜观察两株细胞亚细胞结构-微泡及检测微泡内药物；2、收集MCF-7/ADM细胞来源的微泡为研究材料,运用共聚焦显微镜观察该类微泡与MCF/WT细胞相互作用过程；运用MTT法检测微泡与野生细胞共培养后IC50变化；运用RT-PCR、流式细胞方法分别检测两株细胞MRP1、BCRPmRNA与蛋白水平,两株细胞来源的微泡携带MRP1、BCRPmRNA与蛋白水平,以及MCF-7/ADM细胞微泡与MCF-7/WT细胞共培养后MRP1、BCRPmRNA与蛋白水平。3、收集43例新辅助化疗后乳腺癌患者外周血及癌组织,运用RT-PCR、流式细胞方法检测外周血微泡MRP1mRNA、BCRPmRNA与蛋白水平,免疫荧光检测外周血微泡MUC1阳性率及MUC1与MRP1、BCRP共表达率,运用荧光原位杂交技术、免疫组化技术检测癌组织MRP1mRNA、BCRPmRNA与蛋白水平；采用RT-PCR检测84例晚期转移性乳腺癌姑息化疗患者外周血微泡MRP1、BCRP mRNA水平,并按中位值分为高表达组和低表达组,分析MRP1mRNA、BCRP mRNA水平与PFS的相关性。[结果]1、乳腺癌MCF-7/ADM细胞IC50为21.29 μmol/L,比MCF-7/WT细胞IC50的0.053 μmol/L高400倍左右；多柔比星在MCF-7/WT细胞主要聚集在细胞核,在MCF-7/ADM细胞主要被微泡包裹并迁移至细胞膜外侧出芽；透射电子显微镜显示在MCF-7/ADM细胞表面存在大量微泡,而在MCF-7/WT细胞很少有微泡结构；分离的MCF-7/ADM细胞来源的微泡内存在大量多柔比星。2、微泡与MCF-7/WT细胞体外共培养呈现出随着时间与数量的增加而增加；共培养后细胞IC50为0.954 μmol/L,升高了18倍左右;MCF-7/ADM细胞MRP1、BCRP mRNA相对水平分别为0.63±0.04、0.45±0.08,较MCF-7/WT细胞的0.26±0.07、0.21±0.05高,p0.05；MCF-7/ADM细胞MRP1、BCRP蛋白相对荧光强度分别为13.5±2.1、12.7±1.9较MCF-7/WT的6.5±1.2、7.2±1.4高,p0.05; MCF-7/ADM细胞微泡MRP1、BCRP mRNA相对水平分别为0.63±0.09、0.67±0.06,较MCF-7/WT细胞的0.14±0.07、0.37±0.08高,p0.05；MCF-7/ADM来源微泡表面MRP1、BCRP、Flotillin-2、MUC1蛋白相对荧光值分别为9.99±1.58、10.1±1.6、12.5±2.39、10.2±1.76较MCF-7/WT细胞来源微泡的7.10±2.13、4.3±2.1、5.24±1.49、4.17±1.62高,p0.05；MCF-7/ADM细胞来源的微泡与MCF-7/WT细胞共培养后,MRP1、BCRP mRNA水平升高,p0.05；共培养细胞MRP1、BCRP蛋白荧光强度分别为8.5±1.1、9.2±1.0较MCF-7/WT细胞高,p0.05。3、按RECIST标准评价化疗疗效并分CR/PR组与SD/PD组,SD/PD组患者外周血微泡MUC1阳性率、MUC1-MRP1共表达率以及MUC1-BCRP共表达率分别是11.67±0.76%、24.35±3.52%、20.08±3.38%,均较CR/PR组的6.67±1.03%、1.74±0.75%、1.82±0.65%高,p0.05；外周血微泡内携带MRP1、BCRP mRNA水平,在SD/PD组分别为0.58±0.07、0.61±0.08较CR/PR组的0.07±0.01、0.11±0.03高,p0.01；癌组织检测MRP1、BCRP (mRNA与蛋白)同样发现在SD/PD组较CR/PR组高；MRP1 mRNA与BCRP mRNA高表达组的PFS分别为3.00、2.80月较低表达组的4.66、4.00月短；Cox多因素分析示MRP1、BCRP mRNA水平是晚期转移性乳腺癌姑息化疗的独立预后因素。[结论]乳腺癌微泡能够包裹药物外排保护肿瘤细胞免受化疗药物的杀伤；耐药细胞微泡能够携带MRP1、BCRP并传递给敏感细胞使其获得一定得耐药性；乳腺癌患者外周血微泡MRP1、BCRP与癌组织具有一致性,并与近期化疗疗效相关；微泡MRP1、BCRP mRNA水平与晚期乳腺癌姑息化疗患者PFS相关。
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.9

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本文编号：1138809