miR-197与胃癌相关炎性基因IL-1F5的关系及功能研究

发布时间：2017-11-05 01:03

  本文关键词：miR-197与胃癌相关炎性基因IL-1F5的关系及功能研究

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【摘要】：目的Micro RNA与幽门螺杆菌感染所致的炎症密切相关,而幽门螺杆菌感染是胃癌的重要发病原因。Micro RNA可通过与相关炎性靶基因3’-UTR区结合,调控炎性基因,影响炎性通路的活化及炎性因子的表达,进而调控和参与肿瘤发生发展的多种病理过程。IL-1家族是一类重要的炎性细胞因子,但目前,对IL-1F5的研究相对较少,尤其是与胃癌相关的研究。通过靶基因预测,发现在IL-1F5的3’-UTR区可能存在mi R-197的靶结合位点,本研究主要对预测出的mi R-197与胃癌相关慢性炎性基因IL-1F5的靶关系及功能进行初步验证。方法根据靶基因预测结果及本课题组前期对IL-1F5的3’-UTR区SNP与胃癌易感性关系的研究,人工构建mi R-197的过表达质粒载体p Genesil-1-mi R-197,并与p Genesil-1、mi R-197抑制物和mi RNA抑制物对照共同转染人胃癌细胞系SGC-7901和BGC-823,分别提取各组细胞总RNA和总蛋白。然后,利用q RT-PCR技术分别检测各组mi R-197和内参U6,IL-1F5和内参GAPDH的表达量,Western Blot技术检测IL-1F5和内参GAPDH蛋白的表达量;并对各组的相对表达量进行t检验分析,检验水准α为0.05。所有实验均独立重复三次,结果以均数±标准差表示。所用统计学软件为SPSS21.0。结果(1)mi R-197的过表达质粒载体p Genesil-1-mi R-197经单双酶切鉴定发现酶切片段大小一致,测序结果序列对比分析一致,载体构建成功。(2)人胃癌细胞系SGC-7901和BGC-823中,重组质粒p Genesil-1-mi R-197组与质粒p Genesil-1组mi R-197的相对表达量分别为3.55±0.032和0.77±0.072,3.07±0.056和0.94±0.030(P值均0.001);mi R-197抑制物组与抑制物对照组mi R-197的相对表达量分别为0.33±0.025和0.59±0.069(P=0.003),0.62±0.035和0.84±0.015(P=0.001);差异均有统计学意义。重组质粒p Genesil-1-mi R-197组与质粒p Genesil-1组IL-1F5的相对表达量分别为0.26±0.051和0.39±0.042(P=0.033),1.01±0.087和1.37±0.10(P=0.01);mi R-197抑制物组与抑制物对照组IL-1F5的相对表达量分别为3.23±0.098和0.72±0.063(P0.001),2.94±0.17和1.97±0.061(P=0.001);差异均有统计学意义。(3)人胃癌细胞系SGC-7901和BGC-823中,重组质粒p Genesil-1-mi R-197组与质粒p Genesil-1组IL-1F5蛋白的相对表达量分别为0.09±0.025和0.30±0.103(P0.001),0.18±0.004和0.48±0.013(P0.001),差异均有统计学意义;mi R-197抑制物组与抑制物对照组IL-1F5蛋白的相对表达量分别为0.46±0.025和0.38±0.013(P=0.006),0.65±0.021和0.38±0.027(P0.001),差异均有统计学意义。结论重组质粒p Genesil-1-mi R-197构建及转染成功,且转染后上调了mi R-197在人胃癌细胞系SGC-7901和BGC-823中的表达。重组质粒p Genesil-1-mi R-197转染后下调了IL-1F5在SGC-7901和BGC-823中的表达水平,mi R-197抑制物上调了IL-1F5在SGC-7901和BGC-823中的表达水平。IL-1F5可能是mi R-197的靶基因,且mi R-197负性调节IL-1F5的表达。
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.2

【参考文献】

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1 尹莹;胃癌前病变癌变的动态监测：外周血微小RNA预警模型的建立及其应用[D];浙江大学;2013年

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本文编号：1141890