乳酸诱导肺腺癌细胞上皮间质转化的机制研究

发布时间：2017-11-05 00:36

  本文关键词：乳酸诱导肺腺癌细胞上皮间质转化的机制研究

  更多相关文章： 非小细胞肺癌 乳酸 上皮间质转化 转录因子Snail

【摘要】：背景与目的调查研究表明肺癌是全球发病率和病死率增长最快的恶性肿瘤,目前来说相对的5年生存率仅为18%,造成肺癌患者远期生存率较低的主要原因是肿瘤侵袭及转移,研究数据表明,约80-90%的肺癌患者的死亡是由肿瘤的转移引起的,因此,探讨肺癌侵袭转移的具体机制并采取相应的预防、治疗措施具有重大的临床意义和社会意义。肺癌侵袭转移是一个连续、渐进的涉及多基因并且有诸多步骤的动态过程,可能涉及到多个细胞信号通路的改变和关键基因结构、功能的异常。近年研究表明在肿瘤有氧糖酵解过程中,乳酸的不断积累与肿瘤的转移有密切的关系,而上皮间质转化作为肿瘤转移的一个早期事件可能会受到乳酸积累的影响,所以本研究就乳酸对肿瘤细胞上皮间质转化的影响进行探讨,进而研究乳酸对肿瘤转移的影响。有研究表明,上皮间质转化的过程受几种关键转录因子的调节,转录因子Snail是已知可以调节上皮细胞标志蛋白的一个关键因子,因此本研究进一步探讨了乳酸是否通过影响转录因子Snail的表达来调节上皮间质转化的发生。本文旨在深入研究乳酸和上皮间质转化的联系及其分子机制,有利于进一步阐明肿瘤转移的分子机制,从而为肿瘤治疗提供新的靶点和思路。材料与方法选取人非小细胞腺癌细胞株H1299作为研究对象。⑴采用Transwell小室实验研究乳酸对H1299细胞株迁徙能力的影响,统计穿过ECM膜的细胞数目,进行统计分析,绘制柱状图。⑵用不同浓度的乳酸(5、10、15、20、30m M)刺激H1299细胞,通过Western blotting方法检测EMT分子标志蛋白的变化,应用Image J软件计算目的蛋白与内参蛋白之间的灰度比值,统计分析后绘制蛋白灰度比值的柱形图。⑶在H1299细胞内转染LDHA si RNA,随后用Western blotting检测转染效率及EMT标志物的变化,计算目的蛋白与内参蛋白之间的灰度比值并绘制蛋白灰度比值的柱形图。⑷在H1299细胞外,用不同浓度乳酸对其进行刺激,应用Western blotting方法检测细胞内Snail的变化⑸通过RNA干扰的方法沉默糖酵解关键酶LDHA,利用Western blotting检测转染效率及转染前后Snail的变化。⑹沉默转录因子Snail的表达后,通过Western blotting检测Snail表达沉默前后H1299细胞在乳酸作用下EMT标志物蛋白水平的变化。结果1、20m M乳酸处理组较10m M组H1299细胞穿透ECM膜的细胞数量增多,差异具有统计学意义(p=0.016)2、5,10,15,20,30mM乳酸处理H1299细胞后,细胞内E-cadherin蛋白表达下调,Fibronectin表达上调,且各自的蛋白灰度比值与0m M对照组相比具有统计学差异,且两两相比,差异均具有统计学意义。3、LDHA si RNA转染H1299细胞后,LDHA蛋白较对照组表达水平下降,上皮标志蛋白E-cadherin的表达水平较对照组上调且两者灰度比值差异都具有统计学意义(p=0.000,0.000)。4、5、10、15、20、30m M乳酸处理H1299细胞后,转录因子Snail表达上调,且各自的蛋白灰度比值与0m M对照组相比具有统计学差异(p0.05),且两两相比差异均具有统计学意义(p0.05)。用LDHA si RNA转染H1299细胞后,与对照组相比LDHA蛋白和Snail蛋白表达均下降且灰度比值差异都具有统计学意义(p=0.000,0.000)。5、10m M乳酸处理后,Snail si RNA组和NT si RNA组相比Snail蛋白表达下调且灰度比值具有显著差异性(p=0.000);E-cadherin蛋白表达上调且灰度比值具有统计学意义(p=0.000);Fibronectin蛋白表达下降且灰度比值具有统计学意义(p=0.000)。结论1、乳酸可以促进H1299细胞的体外迁徙能力,随着乳酸浓度增加细胞体外迁徙能力增加,二者呈正比关系。2、在H1299细胞内和细胞外乳酸均可以诱导EMT上皮细胞标志物的表达下降和间质细胞标志物的表达上调,说明乳酸可以促进EMT的发生。3、乳酸可以诱导H1299细胞株转录因子Snail蛋白表达的增加,沉默Snail的表达可以抑制并部分逆转乳酸诱导H1299细胞的EMT。
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R734.2

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 朱继业;黄平治;;睾丸间质的研究[J];男性学杂志;1990年03期

2 石嵩山,何国栋,刘小辉,林若薇;大鼠出生前后睾丸间质细胞的形态学观察和计量分析[J];解剖学杂志;1994年02期

3 钟波;影响上皮-间质相互作用的因素[J];国外医学.泌尿系统分册;2001年S1期

4 邵佑之;郭敏;;大鼠肾间质的形态学研究[J];解剖学杂志;1993年02期

5 李瀚e，

本文编号：1141871