基于适配体特异性作用的乳腺癌细胞表面多种肿瘤标记物同时检测的新方法研究

发布时间：2017-11-05 06:00

  本文关键词：基于适配体特异性作用的乳腺癌细胞表面多种肿瘤标记物同时检测的新方法研究

  更多相关文章： 激活的适配体探针 肿瘤相关蛋白质 癌细胞 癌症检测

【摘要】：癌症是全世界首要的死亡因素,全世界每年有几百万人死于癌症疾病。肿瘤疾病的早期诊断是癌症病人存活的关键因素。肿瘤细胞表面肿瘤标记物的表达种类、表达水平及其构型的变化,是恶性肿瘤早期诊断、分类、预后判断以及治疗的重要指标。尤其是肿瘤蛋白的异常表达与细胞的恶化和突变紧密关联。对肿瘤细胞表面多种肿瘤标记物进行同时检测,不仅能够大幅提高检测的正确率,更有助于阐明肿瘤标记物在细胞癌变过程中的作用。本论文旨在建立一种针对乳腺癌细胞表面多种肿瘤蛋白的荧光检测方法,为乳腺癌疾病的临床诊断提供高灵敏、高准确性的细胞水平的检测方法。该方法不仅实现了乳腺癌细胞表面多肿瘤蛋白的同时检测,还能对不同类型的乳腺癌细胞加以区分,在与肿瘤蛋白相关的癌症早期诊断中有潜在的应用前景。主要内容如下：设计了一种可激活的适配体探针分子,利用其与目标蛋白结合前后荧光信号的改变实现了癌细胞表面多种肿瘤蛋白的同时检测。该探针分子由识别序列和修饰序列两部分组成,其识别部分为能与目标蛋白特异性结合的适配体序列,我们在其两端分别修饰了完全互补的碱基序列(即修饰序列),使探针分子表现为茎环状,并在其5'端标记荧光发光基团,3'端标记淬灭基团。当探针分子与细胞作用前,由于荧光发光基团和淬灭基团靠得很近,发生了荧光能量共振转移(FRET)而荧光淬灭。因此,探针分子本身几乎检测不到荧光信号。而当探针分子与细胞作用后,其茎环状结构被打开,造成荧光基团远离淬灭基团,荧光信号恢复。我们通过设计不同的可激活适配体探针并对其分别标记荧光基团和淬灭基团,实现了细胞内多种肿瘤相关蛋白的同时检测。根据可激活适配体探针荧光信号的恢复达到乳腺癌MCF-7细胞的高灵敏检测,其灵敏度可以低达每毫升10个细胞。该方法的优势在于所设计的可激活的适配体探针有效避免了背景信号的干扰,大幅度地提高了检测的灵敏度。可激活的适配体探针不与血液中非目标物质发生作用进一步揭示了该探针与目标细胞的特异性结合。另外,用三种不同的可激活的适配体探针与不同的乳腺癌细胞作用,通过检测三种肿瘤相关蛋白在各个细胞表面的表达水平,对不同型别乳腺癌细胞做出了区分。可见,该检测方法对乳腺癌疾病的早期诊断有潜在的应用价值。
【学位授予单位】：南京师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.9

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 左衍海;施鑫;;恶性肿瘤转移机制研究新进展[J];医学研究生学报;2008年03期

，

本文编号：1142875